Preparazione di una sospensione arricchita di virus mediante centrifugazione a gradiente di saccarosio

Iniziare con un tubo per ultracentrifugazione contenente un gradiente di saccarosio.

Aggiungere con attenzione il sopranatante contenente il virus sulla parte superiore.

Centrifugare con accelerazione e decelerazione controllate per preservare il gradiente, consentendo alle particelle di sedimentare nello strato corrispondente alla loro densità di galleggiamento durante la centrifugazione.

Le proteine più leggere rimangono nello strato superiore. Le particelle virali intatte si concentrano tra gli strati a densità inferiore e superiore, mentre i detriti cellulari più pesanti si depositano sul fondo.

Scartare gli strati superiori e raccogliere le frazioni di saccarosio centrali, arricchite di virus, in un tubo fresco.

Aggiungere il tampone e mescolare il campione più volte.

Successivamente, stratificare con attenzione la sospensione virale su un cuscinetto di saccarosio a bassa densità in un nuovo tubo.

Centrifugare la sospensione. Le particelle virali più pesanti si depositano sul fondo, mentre i contaminanti più leggeri rimangono nel soprannatante.

Scartare il soprannatante. Svuotare il liquido rimanente capovolgendo il tubo su un tovagliolo di carta.

Risospendere il pellet virale nel tamp