JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:51 min. • August 31st, 2026
Prelevare vettori lentivirali contenenti l'antigene p24 dell'HIV-1, un marcatore proteico utilizzato per il rilevamento.
Aggiungere un detergente per lisare e rilasciare la p24, quindi diluire il campione in modo seriale.
Prendere una micropiastra rivestita con anticorpi monoclonali anti-p24 e un agente bloccante per prevenire il legame non specifico.
Aggiungere le diluizioni del campione e gli standard p24 come riferimenti.
Incubare per permettere l'interazione del p24 con gli anticorpi attraverso un epitopo specifico, quindi rimuovere i componenti non legati.
Incubare con anticorpi policlonali anti-p24 che si legano a diversi epitopi su p24. Rimuovere eventuali anticorpi non legati.
Aggiungere anticorpi marcati con perossidasi che si legano agli anticorpi policlonali. Rimuovere gli anticorpi non legati.
Aggiungere un substrato perossidasi che si trasforma in un prodotto colorato.
Aggiungere un acido per inattivare la perossidasi e stabilizzare il prodotto.
Misurare l'assorbanza corrispondente all'intensità del colore, che è proporzionale alla concentrazione di p24.
Generare il grafico standard e stimare le concentrazioni del campione per determinare il titolo virale.
Rivestire una piastra d
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