JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 5:56 min. • August 31st, 2026
Iniziare con un lisato cellulare contenente DNA cellulare aggregato a proteine cellulari e particelle virali.
Aggiungere ioni di magnesio, seguiti da una nucleasi, per attivare la degradazione enzimatica del DNA cellulare e interrompere gli aggregati DNA-proteina.
Centrifugare per separare i detriti e raccogliere il soprannatante contenente le particelle virali.
Aggiungere il sopranatante su un gradiente discontinuo di iodixanol con concentrazioni crescenti da cima a fondo, quindi riempire il tubo con tampone.
Ultracentrifugare per separare i componenti in base alla densità. Le particelle virali si accumulano all'interfaccia tra gli strati ad alta e media densità.
Inserire un ago a questa interfaccia e raccogliere le particelle virali in un tubo.
Aggiungere un buffer contenente componenti stabilizzanti, che previene l'aggregazione delle particelle virali.
Quindi trasferire la soluzione in un tubo con un filtro a membrana.
Centrifugare per concentrare le particelle virali al di sopra del filtro.
Aggiungere il tampone arricchito con agente stabilizzante e centrifugare nuovamente per ottenere le particelle virali purificate.
Per raccogliere le cellule transfezionate, staccare e sospendere le ce
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