JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:06 min. • August 31st, 2026
Iniziare con una camera cellulare multistrato contenente cellule mammifere transfezionate che producono vettori virali adeno-associati. La camera cellulare consente di ottenere un'elevata resa nella raccolta virale.
Agitare energicamente la camera per staccare le cellule aderenti, rilasciando le cellule contenenti il virus e le particelle virali extracellulari nel mezzo.
Trasferire il contenuto in una provetta e centrifugare per ottenere un pellet di cellule contenenti il virus.
Raccogliere il surnatante contenente il virus extracellulare e trasferirlo in un contenitore di conservazione.
Risospendere il pellet nel buffer di lisi e incubare.
Gli enzimi e i detergenti nel buffer lisano le cellule e rilasciano i virus intracellulari integri nella soluzione.
Centrifugare il lisato per ottenere un pellet dei detriti cellulari. Raccogliere il sopernatante contenente il virus e aggiungerlo alla stessa bottiglia di conservazione contenente il virus extracellulare.
Conservare il sospeso virale grezzo a bassa temperatura fino alla successiva purificazione.
Dopo l'incubazione, agitare vigorosamente la camera di coltura cellulare per staccare le cellule finché il mezzo non appare torbido, quindi versa
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici