JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:35 min. • August 31st, 2026
Iniziare con un lisato cellulare filtrato contenente vettori del virus adeno-associato (AAV) e contaminanti di origine ospite.
Fare passare il lisato attraverso una colonna di affinità a base di eparina.
Le proteine del capside virale si legano elettrostaticamente ai gruppi di eparina carichi negativamente.
Risciacquare la colonna con un tampone per rimuovere i contaminanti non legati.
Applicare un buffer contenente un detergente per solubilizzare i detriti membranosi.
Risciacquare nuovamente con il buffer privo di detergenti.
Introdurre un buffer supplementato con cationi per creare un ambiente ionico, quindi lavare con un buffer a concentrazione moderata di sale per rimuovere le impurità legate debolmente.
Aggiungere un buffer ad alto contenuto salino per interrompere le interazioni tra capside e eparina ed eluire le particelle virali.
Raccogliere le frazioni di eluizione arricchite in particelle virali integre e trasferirle in tubi concentratori centrifughi dotati di membrane filtranti.
Centrifugare i tubi per rimuovere il buffer in eccesso, quindi raccogliere le frazioni virali concentrate in un tubo.
Risciacquare la membrana con il tampone per recuperare le particelle virali residue e m
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