Trasduzione di embrioni di ratto fecondati basata su vettori lentivirali
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:07 min. • August 31st, 2026
Prendere una piastra per microiniezione con una goccia di mezzo di coltura per embrioni al centro, ricoperta con olio minerale per prevenire l'evaporazione.
Posizionare la piastra sotto un microscopio invertito.
Posizionare una micropipetta per microiniezione e una pipetta di ritenzione su un sistema di micromanipolazione sotto il microscopio.
La capillare per microiniezione viene caricata con una sospensione di vettori lentivirali contenenti il transgene.
Successivamente, trasferire gli embrioni di ratto fecondati nel mezzo.
Fissare un embrione utilizzando la pipetta di ritenzione applicando un'aspirazione.
Con un ingrandimento maggiore, inserire la pipetta di microiniezione attraverso il rivestimento extracellulare di glicoproteine dell'embrione, la zona pellucida, e iniettare la sospensione lentivirale nello spazio perivitellino.
Successivamente, trasferire gli embrioni iniettati in una piastra di coltura e incubare.
Il virus entra nell'embrione e rilascia il suo genoma contenente il transgene nel citoplasma.
In seguito, viene trascritto a ritroso in DNA e si integra nel genoma dell'embrione, incorporando il transgene.
Gli embrioni trasdotti sono ora pronti per essere processati.
Per la mi
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