JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:25 min. • September 30th, 2026
Prendere una piastra multipozzetto contenente cellule epiteliali di mammifero.
Preparare diluizioni seriali di un pseudovirus contenente le proteine spike del coronavirus.
Sostituire il mezzo con una sospensione virale diluita in ogni pozzetto.
Incubare con movimenti oscillatori occasionali per consentire alle proteine spike virali di legarsi al recettore della cellula ospite.
Rimuovere il mezzo. Aggiungere un mezzo contenente metilcellulosa per formare un sovrastrato semisolido che limiti la diffusione virale, e incubare.
Il virus entra nella cellula e rilascia il suo genoma RNA.
L'RNA dirige la sintesi di nuovo RNA virale e di proteine, che si assemblano in particelle virali che escono dalla cellula.
I virus rilasciati infettano le cellule adiacenti, producendo una zona chiara chiamata placca.
Rimuovere il sovraspetto e lavare le cellule.
Aggiungere un colorante e incubare la piastra con agitazione.
Lavare e asciugare le pozzette.
Il colorante colora le cellule, mentre le placche rimangono chiare.
Conta le placche visibili in ogni pozzetto per determinare la concentrazione virale.
Per determinare il titolo virale, piastrare le cellule Vero E6 in piastre a sei pozzetti a una densità di semina
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