Neutralizzazione mediata da anticorpi di pseudovirus che esprimono la proteina Spike del coronavirus mediante l'uso di siero di paziente

Prendere una piastra a multi-pozzetti con siero di paziente inattivato termicamente contenente anticorpi specifici per il coronavirus nel pozzetto di prova. Includere il siero umano sano come controllo.

Aggiungere pseudovirus che esprimono le proteine spike dei coronavirus e trasportano RNA codificante per la proteina fluorescente verde ai campioni di siero, e incubare.

Nel pozzetto di prova, gli anticorpi si legano alle proteine spike e neutralizzano i pseudovirus, mentre nel pozzetto di controllo, gli anticorpi non specifici non si legano alle proteine spike, lasciando i pseudovirus non legati.

Aggiungere la miscela a monociti di cellule epiteliali. Incubare per l'adsorbimento virale.

Aggiungere il mezzo semisolido di sovrapposizione in ogni pozzetto per limitare la diffusione virale. Incubare.

Nel controllo, i pseudovirus non legati si legano ai recettori cellulari, entrano nelle cellule, rilasciano l'RNA ed esprimono la GFP, formando foci di infezione fluorescenti.

Nel pozzetto di prova, i pseudovirus neutralizzati dagli anticorpi non riescono a entrare nelle cellule, impedendo la formazione di focolai di infezione.

Sotto un microscopio a fluorescenza, contare i focolai di infezione f