JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:09 min. • September 30th, 2026
Iniziare con una piastra multipozzetta contenente cellule di mammifero esposte a un virus vaccinia ricombinante.
Il virus ricombinante codifica per proteine fluorescenti verdi, rosse e blu, ciascuna controllata da un promotore specifico per stadio, per tracciare rispettivamente le fasi precoce, intermedia e tardiva dell'espressione genica.
Il virus entra nella cellula mediante endocitosi mediata da recettore e rilascia il proprio nucleo virale nel citoplasma.
Il macchinario trascrizionale nel core virale induce l'espressione dei geni precoci, contrassegnata da fluorescenza verde.
Le proteine precoci mediano la decapsidazione del genoma, rilasciando il DNA virale nel citoplasma, dove la DNA polimerasi replica il genoma virale.
In seguito, l'espressione dei geni intermedi, indicata dalla fluorescenza rossa, produce fattori di trascrizione essenziali per l'attivazione dei geni tardivi.
Successivamente, l'espressione dei geni tardivi, indicata dalla fluorescenza blu, genera proteine strutturali necessarie per la formazione di virioni maturi.
Aggiungere un fissativo e incubare brevemente per preservare la fluorescenza.
Rimuovere il fissativo, quindi aggiungere un tampone.
Utilizzare uno spettrof
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