JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:31 min. • September 30th, 2026
Iniziare con una coltura di cellule di mammifero in un mezzo con basso contenuto di siero.
Aggiungere il complesso DNA-lipido alle cellule.
Il complesso contiene plasmidi di impacchettamento lentivirali e un plasmide di espressione che codifica per il gene di interesse.
Incubare per consentire l'ingresso cellulare del complesso.
Sostituire il mezzo per rimuovere il reagente di trasfezione residuo e incubare.
All'interno della cellula, il DNA plasmidico entra nel nucleo e dirige la sintesi dell'RNA virale che trasporta il gene di interesse e i componenti virali, inclusi le proteine del capside e dell'involucro, la trascrittasi inversa e l'integrasi.
Questi componenti si assemblano in particelle lentivirali ricombinanti che si formano a partire dalla membrana dell'ospite.
Raccogliere il mezzo contenente le particelle virali rilasciate.
Centrifugare per formare un pellet dei detriti cellulari e filtrare il sopranatante virale per rimuovere i contaminanti residui.
Centrifugare a velocità elevata per formare un pellet di particelle virali integre.
Scartare il soprannatante e risospendere il pellet virale in un piccolo volume di mezzo fresco.
Conservare il lentivirus ricombinante concentrato a bass
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