JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:08 min. • September 30th, 2026
Iniziare con un plasmide di minigenoma che imita il genoma del virus Ebola e codifica per le proteine strutturali virali, le glicoproteine e un reporter luciferasi.
Aggiungere plasmidi helper che codificano la polimerasi T7, la nucleoproteina virale e i componenti della polimerasi virale essenziali per la replicazione e la trascrizione.
Aggiungere un reagente di trasfezione a base lipidica ai plasmidi, vortexare e incubare la miscela per formare complessi plasmide-lipide.
Aggiungere questa miscela a cellule renali umane, mescolare delicatamente e incubare.
Il complesso lipidico si fonde con la cellula. I plasmidi entrano nella cellula.
I plasmidi helper codificano le rispettive proteine.
In seguito, la polimerasi T7 trascrive il minigenoma in RNA genomico virale, che viene immediatamente rivestito con nucleoproteine.
Il complesso della polimerasi virale si lega all'RNA genomico virale e lo trascrive in mRNA virali. Questi mRNA producono proteine strutturali e glicoproteine virali.
Le proteine virali si assemblano per formare particelle virali simili a virus non patogene, dotate di trascrizione e replicazione, o trVLPs, contenenti il gene reporter della luciferasi.
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