JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:44 min. • September 30th, 2026
Iniziare con una piastra a multi-pozzetti contenente una diluizione seriale del composto in esame per valutare l'attività antivirale.
Aggiungere una sospensione di cellule renali embrionali umane contenente il virus del morbillo ricombinante che esprime la luciferasi in ogni pozzetto.
Incubare per consentire alle cellule di aderire al fondo di ogni pozzetto.
Nel pozzetto di controllo senza il composto in esame, il virus si fonde con la membrana cellulare e rilascia il suo genoma nel citoplasma.
Il genoma virale dirige la produzione di RNA e proteine virali, insieme alla proteina reporter luciferasi.
Nelle pozzette di prova, il composto antivirale inibisce la replicazione virale, riducendo la produzione di luciferasi.
Aggiungere un substrato specifico per la luciferasi in ogni pozzetto, che interagisce con la luciferasi ed emette luminescenza.
Utilizzare un lettore di piastre per misurare l'intensità della luminescenza in ogni pozzetto.
Una minore luminescenza nei pozzetti di prova rispetto al pozzetto di controllo indica un'inibizione virale.
Un calo progressivo della luminescenza con l'aumento della concentrazione del composto indica un'inibizione dose-dipendente della replicazione virale.
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