Isolamento di un singolo virus gigante da una popolazione virale mista utilizzando amebe

Iniziare con amebe coltivate in un mezzo di privazione contenente agenti antimicrobici per prevenire contaminazioni. Le amebe fungono da ospiti suscettibili per i virus giganti.

Aggiungere una sospensione virale diluita contenente una popolazione mista di due virus giganti.

Posizionare la piastra di coltura in un sacchetto per prevenire l'evaporazione del mezzo e incubare.

L'inalazione virale aumenta la probabilità che ciascun ameba incontri un singolo tipo di virus gigante.

Le amebe ingeriscono i virus, che si replicano intracellularmente, provocando l'arrotondamento e il distacco delle cellule infette, con conseguente effetto citopatico.

Monitorare la coltura al microscopio ottico per confermare la presenza di segni citopatici.

Successivamente, trasferire la piastra sul palco di un microscopio invertito.

Posizionare una micropipetta su un micromanipolatore sotto il microscopio invertito. La micropipetta contiene olio minerale biocompatibile per l'aspirazione controllata delle cellule.

Utilizzando la micropipetta, aspirare delicatamente una singola cellula rotonda infetta e rilasciarla in una coltura fresca di amebe. Incubare.

I progeni virali accumulati all'interno della cellula infetta v