JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
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Prendere una sospensione contenente una miscela diversificata di virus, insieme a contaminanti come particelle virali difettose prive di acidi nucleici.
Questi virus sono pre-colorati con un colorante fluorescente legante degli acidi nucleici per distinguere i virus con genomi dai contaminanti.
Fare passare la sospensione attraverso un ordinatore cellulare attivato da fluorescenza, dove ogni particella viene analizzata per dispersione della luce e intensità di fluorescenza.
Il segnale di dispersione della luce riflette la dimensione delle particelle, mentre l'intensità della fluorescenza indica il contenuto di acidi nucleici.
Escludere i contaminanti che non mostrano fluorescenza e gli aggregati che presentano una fluorescenza anormalmente elevata.
Selezionare singole particelle virali che contengono un genoma e ordinarle direttamente su una lamella a camere rivestita con agarosio per l'immobilizzazione.
Coprire ogni pozzetto con ulteriore agarosio per incorporare i virus.
Ora questi sono pronti per l'amplificazione e l'analisi del genoma di singoli virus.
Per separare i virus utilizzando un citometro a flusso dotato di fotomoltiplicatori personalizzati per la diffusione in avanti (FSC-PMT
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