JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:35 min. • September 30th, 2026
Prendere colture cellulari di mammifero. Infettare la coltura sperimentale con un virus, lasciando la coltura di controllo non infetta.
Lasciare che avvenga l'adsorbimento del virus, quindi sostituire il mezzo.
Il virus entra nella cellula e rilascia il suo genoma. Il virus esprime una proteina di virulenza che destabilizza i complessi dei fattori di trascrizione dell'ospite e sopprime la trascrizione dell'ospite.
Le cellule di controllo, tuttavia, mantengono una trascrizione attiva.
Aggiungere un analogo dei nucleosidi che si incorpora negli RNA nascenti.
Raccogliere le cellule lavate.
Fissare le cellule per preservarne la struttura. Centrifugare le cellule e lavarle con un tampone.
Aggiungere un detergente per permeabilizzare le cellule, quindi lavare.
Aggiungere un colorante fluorescente chimicamente modificato che reagisce con l'analogo di nucleoside per etichettare gli RNA nascenti; quindi lavare.
Eseguire una immunomarcatura per etichettare fluorescentemente gli antigeni virali, identificando così le cellule infette.
Utilizzare la citometria a flusso per rilevare la fluorescenza dell'RNA cellulare e dell'antigene virale.
Confrontare l'intensità della fluorescenza dell'RNA tra le popolaz
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