JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:36 min. • September 30th, 2026
Iniziare con una coltura di cellule epiteliali renali umane coltivate in un mezzo ricco di nutrienti.
Sostituire il mezzo con un mezzo a basso contenuto di siero per minimizzare l'interferenza del siero e migliorare l'efficienza di trasfezione.
Aggiungere la miscela di trasfezione alle cellule in modo goccia a goccia.
La miscela contiene un costrutto di DNA retrovirale che trasporta il gene di interesse, un plasmide di impacchettamento che fornisce le proteine virali essenziali e la polietilenimina, che forma complessi con il DNA plasmidico per facilitare la trasfezione.
Incubare le cellule per consentire l'assorbimento del complesso di DNA.
Sostituire il mezzo per rimuovere i reagenti di trasfezione residui.
All'interno della cellula, il DNA plasmidico entra nel nucleo, dove indirizza la produzione di proteine virali e di RNA virale contenente il gene di interesse.
Questi componenti si assemblano e gemmano nel mezzo sotto forma di particelle retrovirali ricombinanti.
Raccogliere il mezzo contenente il virus e conservarlo brevemente a bassa temperatura per mantenere la stabilità virale.
Centrifugare per ottenere un pellet dei detriti cellulari.
Aliquotare il surnatante virale, congelarlo rap
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici