Generazione del virus respiratorio sinciziale ricombinante marcato con GFP mediante un sistema di espressione T7

Iniziare con una miscela di plasmidi contenente plasmidi helper che codificano le proteine di replicazione e trascrizione del VSR e un plasmide separato portatore di un cDNA di antigenoma del VSR completo che esprime la GFP.

Ogni plasmide è posto sotto il controllo di un promotore T7.

Aggiungere un reagente di trasfezione a base di liposomi e incubare per consentire la formazione del complesso.

Introdurre questi complessi in cellule renali di criceto geneticamente modificate che esprimono la polimerasi T7 dell'RNA e incubare.

I complessi plasmidici entrano nelle cellule, dove la RNA polimerasi T7 trascrive i plasmidi RSV.

Questo produce mRNA virali che codificano per le proteine della replicazione e della trascrizione e genera RNA antigenomico a senso positivo di RSV.

Utilizzando il macchinario dell'ospite, questi mRNA producono proteine di replicazione e trascrizione virali che formano un complesso polimerasico funzionale di RSV.

Il complesso della polimerasi del virus respiratorio sinciziale (RSV) converte quindi l'RNA a senso positivo in RNA genomico virale.

Questo RNA genomico dirige la sintesi di mRNA virali, che codificano per proteine strutturali e per la GFP.

Sotto un microscopio a