JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:32 min. • September 30th, 2026
Eseguire diluizioni seriali di una sospensione di virus respiratorio sinciziale (RSV).
Inoculare ciascuna diluizione in pozzetti separati di una piastra multipozzetto seminata con cellule di mammifero suscettibili all'RSV.
Incubare per consentire al virus di legarsi ai recettori della superficie cellulare, mediare la fusione della membrana e rilasciare il suo genoma nel citoplasma.
Successivamente, applicare un mezzo di sovrapposizione semisolido per limitare la diffusione del virus e incubare.
Le cellule infette esprimono la proteina di fusione virale che media la fusione da cellula a cellula, formando strutture multinucleate chiamate sincizi.
Con il progredire della replicazione virale, questi sincizi degenerano e formano zone chiare note come placche.
Agitare delicatamente la piastra per rimuovere l'overlay e risciacquare le cellule per eliminare i detriti.
Applicare un colorante per colorare le cellule vitali, lasciando le placche non colorate.
Rimuovere il colorante, decontaminare la piastra con candeggiante e risciacquare con acqua.
Lasciare asciugare la piastra all'aria.
Selezionare le pozzette con placche distinte e contarle per determinare il titolo virale.
Per eseguire un saggio di
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