JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
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Iniziare con una piastra multipozzetto contenente cellule epiteliali infettate con un virus geneticamente modificato.
Il virus trasporta un transgene che codifica per l'enzima luciferasi.
Prelevare colture fresche di cellule epiteliali in una piastra multipozzetto con pareti bianche.
Trasferire il surnatante contenente concentrazioni sconosciute di virus nei pozzetti con pareti bianche.
Contemporaneamente, aggiungere concentrazioni note del virus come standard.
Centrifugare la piastra per favorire un contatto stretto tra le particelle virali e i recettori cellulari dell'ospite, quindi incubare.
Il virus entra nella cellula ospite e trasferisce il suo genoma a RNA a filamento negativo.
La polimerasi virale dell'RNA trascrive quindi il genoma in mRNA.
Utilizzando il macchinario cellulare dell'ospite, l'mRNA viene tradotto in proteine virali, inclusa la luciferasi.
La quantità di luciferasi accumulata all'interno della cellula ospite aumenta all'aumentare della concentrazione virale.
I campioni sono pronti per ulteriori stime delle concentrazioni virali mediante il saggio di luciferasi.
Preparare una curva standard di VSV-Delta-51 in DMEM privo di siero in modo che la concentrazione finale di un
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