JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 4:36 min. • September 30th, 2026
Iniziare con lentivirus che portano un gene di resistenza agli antibiotici.
Centrifugare per separare i detriti. Raccogliere il sopernatante contenente i virus e farlo passare attraverso una membrana priva di surfattante.
Questo permette ai lentivirus di passare, trattenendo al contempo i contaminanti.
Ultracentrifugare per concentrare i virus. Rimuovere il soprannatante e aggiungere il tampone per risospendere i virus.
Quindi trasferire la sospensione in una provetta da microcentrifuga e vorticare.
Centrifugare per rimuovere le bolle. Quindi, aggiungere i virus a un mezzo di infezione contenente cellule staminali embrionali di topo e mescolare.
Centrifugare per migliorare il contatto tra virus e cellule, quindi incubare.
I virusi consegnano i loro genomi all'interno delle cellule.
Rimuovere il mezzo, aggiungere mezzo fresco e incubare.
Il genoma virale viene convertito in DNA e si integra nel genoma dell'ospite, consentendo la produzione di mRNA che dirige la sintesi della proteina di resistenza all'antibiotico.
Sostituire il mezzo con mezzo fresco supplementato con l'antibiotico selettivo e incubare.
Le cellule che esprimono la proteina di resistenza all'antibiotico sopravvivono, generando
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