JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:41 min. • September 30th, 2026
Prendere un tubo contenente una coltura iniziale di cellule di E. coli ingegnerizzate, che ospitano il gene della polimerasi T7 regolato dall'operatore lac insieme a un plasmide di espressione.
Il plasmide contiene un gene che codifica per una proteina del capside derivata dal batteriofago Qβ.
Questo gene è regolato da un promotore T7 e da un operatore lac.
Trasferire la coltura in un matraccio contenente un mezzo di coltura.
Incubare con agitazione per favorire la crescita batterica.
Aggiungere un analogo sintetico dell'allolattosio che inattiva il repressore lac, inducendo l'espressione della polimerasi T7.
La polimerasi T7 si lega quindi al promotore T7 sul plasmide e trascrive il gene della proteina del capside, che viene tradotto per produrre la proteina del capside.
Queste proteine del capside si assemblano autonomamente in particelle simili a virus (VLP) che formano impalcature non infettive.
Trasferire la coltura in bottiglie per centrifuga.
Centrifugare per formare il pellet delle cellule.
Scartare il soprannatante e trasferire il pellet in un tubo.
Il pellet cellulare, contenente VLP intracellulari, è pronto per la purificazione.
Prima di iniziare la procedura per l'espressione del b
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici