JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:51 min. • September 30th, 2026
Iniziare con particelle simili a virus, o VLP, contenenti legami disolfuro esposti sulla superficie del capside.
Aggiungere un agente riducente per scindere i legami disolfuro, generando gruppi tiolo liberi preservando al contempo la struttura del capside.
Combinare i VLP ridotti con un polietilene glicole reattivo verso i tioli, o linker PEG, per prevenire la ri-ossidazione dei gruppi tiolici.
Il linker PEG riunisce ogni coppia di tioli formando due legami covalenti.
Questa coniugazione covalente forma anche una struttura fluorescente che appare di un giallo brillante sotto illuminazione UV.
Ruotare la miscela per un periodo prolungato per consentire una coniugazione completa.
Utilizzando la filtrazione centrifuga, purificare i VLP PEGilati rimuovendo le molecole piccole non reagite, mantenendo intatti i coniugati.
Eseguire una SDS-PAGE non riducente per rilevare l'attacco del PEG, indicato da una banda fluorescente della proteina del capside.
Valutare l'integrità strutturale mediante elettroforesi in gel di agarosio nativo, in cui bande simili per VLP PEGilati e non PEGilati confermano la presenza di VLP integri.
Questo protocollo produce VLP fluorescenti funzionalizzati con PEG, adatti p
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