JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:36 min. • September 30th, 2026
Iniziare con un complesso ricombinante nucleoproteina-fosfoproteina privo di RNA e specifico per un virus.
Incubare il complesso con oligonucleotidi di RNA specifici per il virus per avviare l'assemblaggio di particelle simili a nucleocapsidi.
Durante l'assemblaggio, l'RNA virale sposta il frammento della fosfoproteina, consentendo alla nucleoproteina di racchiudere l'RNA e formare particelle simili ai nucleocapsidi.
Centrifugare il campione per rimuovere qualsiasi precipitato.
Prendere una colonna di cromatografia a esclusione dimensionale pre-equilibrata, contenente una resina porosa, e caricarvi il sopranatante.
Man mano che il campione scorre attraverso la colonna, i complessi di nucleocapside di grandi dimensioni vengono esclusi dai pori ed eluiscono per primi.
I complessi proteici di medie dimensioni e le piccole molecole di RNA entrano nei pori ed eluiscono in un secondo momento.
Monitorare l'assorbanza dell'eluito per generare un profilo di eluizione con picchi distinti.
Il primo picco mostra nucleocapsidi assemblati, seguiti da complessi proteici più piccoli e RNA libero.
Raccogliere la frazione corrispondente al picco dei nucleocapsidi per la validazione e ulteriori analisi.
Per l'
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