JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 2:37 min. • September 30th, 2026
Iniziare con una piastra multipozzetto contenente cellule epiteliali infette con il virus Zika, un virus a RNA a singolo filamento.
Durante l'infezione, il virus rilascia l'RNA che forma un intermedio a doppio filamento o RNA a doppio filamento (dsRNA).
Per rilevare questi intermediati di dsRNA, sostituire il mezzo con metanolo per permeabilizzare le cellule e preservare l'integrità cellulare.
Rimuovere il metanolo e lavare con un buffer.
Aggiungere una soluzione di blocco per prevenire il legame non specifico degli anticorpi.
Aggiungere un anticorpo primario specifico per l'RNA a doppio filamento virale.
Incubare con agitazione delicata a bassa temperatura per consentire all'anticorpo primario di legarsi al dsRNA virale.
Risciacquare con un buffer, aggiungere un anticorpo secondario coniugato con un fluorocromo rosso e incubare.
Gli anticorpi secondari si legano agli anticorpi primari.
Lavare con un buffer, quindi aggiungere un colorante fluorescente legante del DNA per colorare il nucleo.
Osservare al microscopio a fluorescenza per visualizzare l'intermedio di dsRNA virale marcato all'interno della cellula infetta.
Per l'immunocitochimica, rimuovere il mezzo dalle pozzette della piastra a 1
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