Valutazione di un sistema di overlay liquido per i saggi di placche virali

Prendere una piastra multipozzetta contenente monocapate di cellule epiteliali e aggiungere una sospensione virale nelle pozzette.

Incubare con movimenti oscillatori occasionali per distribuire uniformemente i virus. I virus si attaccano e penetrano nelle cellule.

In un pozzetto, aggiungere agarosio fuso, che si solidifica in un rivestimento semisolido.

In un'altra pozzetta, aggiungere un rivestimento liquido viscoso a base di cellulosa microcristallina e incubare. La sua viscosità limita la diffusione virale, in modo simile al rivestimento semisolido.

All'interno della cellula, il virus rilascia il suo genoma e produce nuovi RNA e proteine virali.

I nuovi virus si assemblano, escono dalle cellule e causano la lisi cellulare.

I virusi rilasciati infettano le cellule vicine, formando placche.

Aspirare il rivestimento liquido e aggiungere un fissativo per preservare le cellule non lisate.

Scartare il fissativo ed eliminare l'agarosio sovrapposto.

Aggiungere un colorante che colora le cellule vitali, lasciando le placche non colorate. Successivamente, rimuovere il colorante in eccesso.

L'overlay liquido produce un numero di placche paragonabile a quello dell'overlay semisolido, sostenendone l'u