Name: Dissection העין עכבר על הר שלם של האפיתל פיגמנט רשתית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-27T16:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 47 s
Description: למדו את שיטת ניתוח העין בעכבר לקבלת הרכבה שלמה של האפיתל הפיגמנט הרשתית. טכניקה זו מאפשרת חקר התפתחות הרשתית ומחלות עיניים בחיות מודל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי למדעי בריאות הסביבה [K22ES012264 כדי AJRB] ו אמריקאי האגודה למלחמה בסרטן InstitutionalResearch גרנט [ACS-IRG-00-173-04] טייס projectaward [אל AJRB]. אנו מודים גם אנשי המעבדה הבישוף לקריאה ביקורתית של כתב היד והערות על וידאו ואדם בראון בפרט, למשל של מה לא לעשות. אנו מודים ד&quot;ר דונלד מקיואן לחקר הסרטן Greehey ילדים המכון מאפשר לנו להשתמש היקף הניתוחים שלו / וידאו מצלמה הגדרת לצילום הווידאו לנתיחה. אנו מודים Daron בראון מכשירים Corte עבור חידוד ותיקון של כלי microdissection שלנו.

1. הסרה של רקמה חיצוניים מבחוץ של העין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 1X PBS לתוך המכסה של צלחת 35mm. הרמה צריכה להיות ממש מתחת שפת המכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים ישר, להעביר עין (ים) מהצינור אחסון המנה 35mm. עיניים שקועות PBS משתי סיבות: 1. הרקמות החיצוניות יהיה "לצוף" הרחק מן העין, כך שתוכל לראות ולהסיר אותם בקלות, 2. במהלך הניתוח, העין באופן טבעי לשמור על הצורה הכדורית שלו בעוד ההשעיה, ומאפשר לך לעבוד עם הצורה הזו ולא נגדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בשני זוגות של מלקחיים זווית (45 ° ו 15 °), להסיר בעדינות רבה כמו שריר ורקמת חיבור ככל האפשר, מושך את רקמת נגד הזרם (כלומר לכיוון הקרנית). יש רקמת חיבור יישאר. מאמץ צריך להיעשות כדי לסחוט את גלגל העין מעט ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המסחר מלקחיים שלך 15 מעלות במשך מספריים האביב. בעוד מחזיק את העין יציב עם מלקחיים 45 °, להשתמש במספריים באביב כדי לחתוך שריר הנותרים רקמת חיבור, כמו גם את עצב הראייה. * טיפ: השתמש בקצה החיצוני של המספריים לדחוף את רקמת נגד הזרם (לכיוון לחלק corneo-scleral) ולאחר מכן לקצץ. המשך עד שכל הרקמות החיצוניות הוסר מן העין. </li></ol> 2. הסר את הקרנית ואת העדשה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם הקרנית פונה כלפי מעלה, יש להשתמש במלקחיים 45 מעלות לצבוט את קפל קטן במרכז הקרנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים האביב, לעשות חתך קטן בבסיס של דש. עזוב דש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיק את העיניים עדיין עם מלקחיים, הכנס את להב מספריים נמוך לתוך בניצב החתך ולעשות חתך לכיוון לחלק corneo-scleral. נסו לשמור על הלהב התחתונה תחת הקשתית כך גם קרנית איריס נחתכים. אין לחתוך את כל הדרך לחלק corneo-scleral. שמור מספריים מוכנס בעיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים שלך 45 °, בזהירות לסובב את העיניים כך מספריים שלך מקבילות לחלק corneo-scleral ולעשות חתך קטן. לאט לאט לסובב את העין ° 360, מה שהופך חתכים קטנים כל הדרך מסביב. שוב, מנסה לשמור את הלהב התחתון של המספריים האביב שלך לפי קשתית כך גם את איריס הקרנית נחתכים. הרם את איריס הקרנית רחוק משאר העין וזורקים אותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הטה את העין על צידו ולחצו בעדינות על החצי האחורי של העין, מה שאילץ את העדשה החוצה. מחק את העדשה. החלק הפנימי של עיינית הנותר הוא בשורה של הרשתית העצבית, אשר צריך להיראות חלקות אטום. </li></ol> 3. הרובע עיינית וכתוצאה מכך, וכתוצאה מכך 4 - "עטורת פרחים", פרח דמוי מבנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העין צריכה להיות ממוקמת כך פתיחת עיינית היא בניצב לגוף שלך. שימוש במלקחיים 45 ° עד עיינית שלך יציב ואת המיקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזקת מספריים האביב שלך מולך אז הם ניצבים הגוף שלך, להכניס את הלהב התחתון של המספריים האביב שלך לתוך הקצה העליון של גביע לפתוח את העין. בעזרת מלקחיים שלך 45 °, בזהירות ליישר את כוס העין כך חתך בודד, ישר יכול להיות עשוי מחלקים corneo-scleral כלפי ראש עצב הראייה. כל הקיצוצים צריכה להיות בניצב לחלק corneo-scleral ו אלא אם כן צוין, צריך ללכת קרוב לראש עצב הראייה ככל האפשר מבלי לחתוך אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סיבוב 180 ° עיינית, שמירה נצבות עם הגוף שלך. השתמש בטכניקה בשלב 3.2 לעשות חתך בניצב השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב את עיינית וחזור על הטכניקה המתוארת 3.2 לבצע שני חתכים נוספים. כל ארבעת קיצוצים צריך להיות קרוב עד 90 ° בנפרד האפשרי. יש לזכור כי העין אינה כדורית מושלמת כך יהיו כמה השתנות. </li></ol> 4. חותכים כל אחד מארבעת "עלי כותרת" במחצית, והתוצאה היא מבנה הפרח דמוי שמונה עלה כותרת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את עיינית לרבעים מצלחת 35mm לשקופית נקי. עם עיינית פונה כלפי מעלה, סקופ תחת אותה עם מלקחיים 45 מעלות. הרם בזהירות את זה של הנוזל ומניחים אותו בשקופית נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בשני זוגות של מלקחיים זוויתי, בעדינות לפתוח את העיניים, עם הרשתית העצבית פונה כלפי מעלה. אין להסיר העצבית ברשתית העין, זה עוזר לשמור על כמה צורה כדורית שלה אז אתה לא פועלים נגד זה. הוא גם מגן על הרשתית מפני נזק בטעות בהליכים הבאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב את השקף עד שאחד עלי הכותרת הוא בניצב לגוף שלך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים 15 שלך מעלות, בעדינות לתפוס את הפינה של עלי כותרת. הפינה של עלה כותרת יש הקרנית, לא הרשתית הרשתית העצבית או. הרם את בפינה בעדינות, שמאפשר לו לשמור על העקמומיות שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הלהב התחתון של המספריים האביב שלך בין כותרת לבין שקופיות. הקו עד מספריים שלך כזה אחד, ישר, בניצב לחתוך יכול להיות עשוי מחלקים corneo-scleral כלפי ראש עצב הראייה. גזור קרוב לראש עצב הראייה כפי withou אפשרילא לחתוך אותו. עזוב עלה כותרת, המאפשר זה לשכב על השקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב את השקופית 90 °, כך עלה כותרת הבא הוא בניצב לגוף שלך. חזור על שלב 4.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 4.5 ו 4.6 פעמיים נוספות. המבנה וכתוצאה מכך צריך להיראות כמו פרח שמונה עלה כותרת. </li></ol> 5. הסר את הרשתית העצבית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 100-200 μL של 1X PBS על הדגימה. זה ימנע את הרשתית העצבית יידבקו כפי שאתה לקלף אותו על הרשתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדרך כלל הרשתית העצבית מחובר באופן רופף על הרשתית. לעומת זאת, לקחת תרגול ומיומנות כדי להסיר רק את הרשתית העצבית ולא הרשתית. בעדינות לתפוס עלה כותרת של הרשתית העצבית עם זוג אחד מלקחיים זווית תוך ייצוב (החזקת) את שאר בעין עם זוג השני של מלקחיים זווית. משוך את הרשתית העצבית רחוק משאר של העין. המשך הליך זה עד הרשתית העצבית כולה הוסרה. * טיפ: מקל קצה מלקחיים 15 שלך · אל ראש עצב הראייה לעגן את העין. ואז להשתמש במלקחיים 45 מעלות לטאטא מתחת הרשתית העצבית והרם אותו משם. זה בדרך כלל הטובה ביותר להרים את הרשתית העצבית מהראש עצב הראייה לכיוון לחלק corneo-scleral. הקפידו להתרחק מכל שאריות רופפת של איריס. הקשתית דביק למדי, אחרת יכול להיתקע על הרשתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הדגימה עם 1X PBS. פיפטה 100-200 μL של 1X PBS לתוך הדגימה ולמצוץ אותו בחזרה. בטל PBS. חזור על הצורך להסיר אבק ופסולת. </li></ol> 6. הר את הדגימה (ים) בשקופית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 80-90 μL של גליצרול 90% לשקופית חדשה צורה מלבנית. השתמש בצד של קצה פיפטה לעשות למרוח אפילו, מלבני של גליצרול. (זהו הליך פיחלץ שני הרשתית בשקופית אחת.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הזרוע התחתונה של 15 ° מלקחיים תחת הדגימה. הרם בעדינות את הדגימה את השקופית הניתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להוריד את הדגימה לתוך גליצרול. בעדינות לכשכש מלקחיים כמו שאתה מושך אותם מתחת הדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 6.1-6.3 עבור הדגימה אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סובב את השקופית כך שהצד הארוך בניצב לגוף שלך. החזק זכוכית לכסות שלך 45 ° זווית לשקופית, כך שהוא נוגע שקופיות. הזז אותו לכיוון למרוח את גליצרול עד שהם נוגעים. שמירה על קשר בין הזכוכית המכסה והחלק, לאט להזיז את זכוכית לכסות הרחק למרוח, לעבר קצה המגלשה. בשורה ארוכה של שקופיות הצדדים ואת מכסה זכוכית, כך הם מקבילים. החזק את קצוות הזכוכית המכסה בין האגודל לאצבע המורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרימי את 15 מלקחיים · ב היד השנייה. עריסת את הקצה העליון (חינם) של זכוכית המכסה בכיפוף של היד. לאט לאט, להוריד את מכסה זכוכית. כאשר הקשר הוא בין הזכוכית המכסה את גליצרול, לעצור ולחכות גליצרול כדי להגר. חזור על הפחתת ומחכה עד mounts כל הרשתית מכוסים במלואם. זה כדי למנוע את גליצרול צמיגה מאוד ללכוד בועות אוויר. אל תלחץ על COVERGLASS - גליצרול יהיה לסחוט אותו מתחת, מה שהופך הידבקות עניים מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברור עם לק, צבע מסביב למתחם שבו הזכוכית המכסה והחלק להיפגש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את השקף על גבי מדף ריק לייבוש. </li></ol> 7. נציג תוצאות: התוצאה של הליך זה יש מבנה שנראה כמו פרח צריך להיות סימטרי למדי. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 1"> באיור 1. שלמות הרשתית הר מן העכבר wildtype C67Bl/6J. הרשתית משחור או חיות agouti צריך להיות חום כהה בצבע צריך משטח חלק. זה נורמלי לשים לב הגליות בתוך הטופוגרפיה של עלי הכותרת. פיגמנטציה על כל דגימה לתת יכול להיות משתנה במקצת, עקב צפיפות משתנה של פיגמנטציה של הרשתית והן דמית העין הבסיסית. חיצים הצבע הלבן "ערוצי" hypopigmented - זה נורמלי נובע vasculature הבסיסית של העין. החץ הכחול מצביע על נזק פיזי הרשתית והן דמית העין הבסיסית. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 2"> איור 2. שלמות הרשתית הר מן העכבר לדלל. דוגמאות שנקטפו מן החי ניתן לדלל טווח צבע כמעט שקוף לבית קפה בחלב וכל דגימה אחת היא רוצה השתנות בתוך זה, המצוין עיגולים שחורים כאן. באופן כללי, הרשתית שנקטפו מן החי הצעיר קלים אלה שנקטפו מן החי הם ישנים יותר כהה. החצים מצביעים שחור חלק vasculature הבסיסי, המופיע hypopigmented. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 3"> איור 3. מכתים Phalloidin יכול לשמש כדי לזהות נזק פיזי הרשתית. מכתים Phalloidin בבירור מתאר את קרום התא, מראה את צורת משושה של האפיתל. (א) דוגמה של עכבר שחור. (ב) דוגמה מתוך עכבר לדלל. <img src="/files/ftp_upload/2563/2563fig4.jpg" alt="איור 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="איור 4"> איור 4. הרשתית גזור גרוע מכל עכבר לדלל. (א) בסוגריים מצביעים בשולי הקרנית כי הם רחבים מדי, דבר שיכול לגרום קריסה ו / או קיפול. בתוך העיגול השחור אתה יכול לראות כמויות עודפות של רקמות זרים שלא הוסרו מהחלק האחורי של העין. הם בולטים במיוחד כי המדגם הוא מבעל חיים לדלל. עלה כותרת בצד שמאל למטה הוא מקופל חלקית מעל. (ב) זה הר כולו מראה של שבשבת. החצים מצביעים שחור חלק הקיצוצים שנעשו. רבים חתכים לחלק corneo-scleral כלפי ראש עצב הראייה אינם בקנה אחד עם קוטר. (ג) חיצים שחורים לציין כיצד הקיצוץ צריך להיות עשוי, בהתאם לקוטר ו בניצב המשיק.

<ol><li>Bishop, A. J., Kosaras, B., Sidman, R. L., Scheistl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benzo%28a%29pyrene+andX-rays+induce+reversions+of+the+pink-eyed+unstable+mutation+in+the+retinal+pigmentepithelium+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat.+Res.%22%5BJournal%5D)">Benzo(a)pyrene andX-rays induce reversions of the pink-eyed unstable mutation in the retinal pigmentepithelium of mice.</a> Mutat. Res.. 457, 31-31 (2000).</li>
<li>Reliene, R. H. lavacove, Mahadevan, A., Baird, B., M, W., Schiestl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diesel+exhaust+particles+cause+increased+levels+of+DNA+deletions+after+transplacental+exposure+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat.+Res%22%5BJournal%5D)">Diesel exhaust particles cause increased levels of DNA deletions after transplacental exposure in mice.</a> Mutat. Res. 570, 245-2452 (2005).</li>
<li>Bishop, A. J., Barlow, C., Wynshaw-Boris, A. J., Scheistl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atm+deficiency+causes+increased+frequency+of+intrachromosomal+homologous+recombination+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Atm deficiency causes increased frequency of intrachromosomal homologous recombination in mice.</a> Cancer Res. 60, 395-399 (2000).</li>
<li>Brown, A. D., Claybon, A. B., Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+WRN+helicase+domain+is+not+required+for+spontaneous+homologous+recombination-mediated+DNA+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">Mouse WRN helicase domain is not required for spontaneous homologous recombination-mediated DNA deletion.</a> J. Nucleic Acids. , (2010).</li>
<li>Claybon, A., Karia, B., Bruce, C., Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PARP1+suppresses+homologous+recombination+events+in+mice+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">PARP1 suppresses homologous recombination events in mice in vivo.</a> Nucleic Acids Res. , Forthcoming (2010).</li>
<li>Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-%2C+and+Gadd45a-deficient+mice+show+an+increased+frequency+ofhomologous+recombination+at+different+stages+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">p53-, and Gadd45a-deficient mice show an increased frequency ofhomologous recombination at different stages during development.</a> Cancer Res. 63, 5335-5343 (2003).</li>
<li>Bodenstein, L., Sidman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+development+of+the+mouse+retinalpigment+epithelium.+Part+I.+Cell+and+tissue+morphometrics+and+topography+of+mitoticactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Growth and development of the mouse retinalpigment epithelium. Part I. Cell and tissue morphometrics and topography of mitoticactivity.</a> Dev Biol. 121, 192-204 (1987).</li>
<li>Burke, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+phenotype+and+the+RPE%3A+is+the+answer+blowing+in+the+Wnt%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Epithelial phenotype and the RPE: is the answer blowing in the Wnt?</a> Prog Retin. Eye Res. 27, 579-595 (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הרשתית היא אתר של האו&quot;ם p assay, ב assay-vivo של תיקון הומולוגיה מכוונת. Assay בלתי p נעשה שימוש כדי לחקור את ההשפעות של נזקי דנ&quot;א שונה 1,2 ו נזק לדנ&quot;א איתות גנים לתקן 3,4,5 על תדר של תיקון, הומולוגיה מכוונת. Assay זה רגיש במיוחד, גילוי תא בודד אירועים על הרשתית 1. היא יכולה גם לזהות הבדלים העיתוי של הומולוגיה מכוונת אירועים לתקן במהלך הפיתוח 6. העין Murine מפתחת רדיאלית החו...

<table><tbody><tr><td>פינצטה ישרה</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-4903</td><td>קצה: .08 x .04 mm חומר: INOX</td></tr><tr><td>פינצטה 45&amp;#x00B0;</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5005</td><td>קצה: .05 x.01 mm חומר: INOX</td></tr><tr><td>פינצטה 15&amp;#x00B0; &quot;up&quot;</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5045A</td><td>קצה: .1 x.06 mm חומר: INOX</td></tr><tr><td>מספרי קפיץ</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5604</td><td>רוחב קצה משולב 0.3mm אורך להב חיתוך 3mm חומר: פלדת אל חלד</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דיסקציה בינוקולרי</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>Discovery V.8</td><td>השתמש במקור אור מחזיר</td></tr><tr><td>phalloidin</td><td>Invitrogen</td><td>A22283</td><td>Alexa Fluor 546</td></tr></tbody></table>

dissection העין עכבר על הר שלם של האפיתל פיגמנט רשתית

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

אפיתל הפיגמנט ברשתית (הרשתית) שוכנת בחלק האחורי של העין של יונקים, ממש מתחת לרשתית עצביים, אשר מכיל את photoreceptors (מוטות קונוסים). הרשתית היא monolayer של תאים cuboidal וחבריו בשיתוף פעולה הדוק עם פיגמנט הרשתית העצבית בדיוק מעל אותה. אגודה זו הופכת את הרשתית עניין רב החוקרים ללמוד מחלות רשתית. הרשתית היא גם באתר של assay ב-vivo של תיקון הומולוגיה ביים DNA, assay בלתי p. העין עכבר קשה במיוחד לנתח בשל גודלו הקטן (כ 3.5 מ&quot;מ קוטר) ואת הצורה הכדורית שלו. מאמר זה מדגים בפירוט הליך לנתיחה של העין וכתוצאה מכך הר שלם של הרשתית. בהליך זה, אנו מראים כיצד לעבוד עם, ולא נגד, במבנה הכדורית של העין. בקצרה, ברקמת השריר החיבור, ואת עצב הראייה יוסרו מהחלק האחורי של העין. ואז, הקרנית ואת העדשה יוסרו. בשלב הבא, חתכים אסטרטגי נעשים כי התוצאה משטחת משמעותי של הרקמה הנותרת. לבסוף, הרשתית העצבית היא הרימה בעדינות את וחשף הרשתית שלם, אשר מחוברת עדיין דמית העין הבסיס והלחמית. הר זה כל שניתן להשתמש בהם כדי לבצע את assay בלתי p או הערכה או אימונוהיסטוכימיה immunofluorescent של רקמת הרשתית.

הפגנה רשמית של דיסקציה של העין עכבר, וכתוצאה מכך הר שלם של אפיתל הפיגמנט ברשתית.

Dissection העין עכבר על הר שלם של האפיתל פיגמנט רשתית

האפיתל הפיגמנטי של הרשתית (RPE) שוכן בחלקו האחורי של עינו של היונק, ממש מתחת לרשתית העצבית, המכילה את הפוטורצפטורים (קולבליים ו...

שמי אליסון קלאבון. אני עוזרת מחקר של ד"ר אלכס בישופ במכון גרי למחקר סרטן ילדים במרכז מדעי הבריאות של UT בסן אנטוניו, טקסס. היום אני אדגים כיצד לבצע נתיחה של עין מכרסם לצורך בידוד של שכבת האפיתל הפיגמנטרי של הרשתית באופן מלא.רקמה זו מעניינת לצורך חקר התפתחות הרשתית ומחלותיה, והיא משמשת גם כאתר לבדיקת תיקון DNA מוכוון הומולוגיה in vivo. לכן, בואו נתחיל. כאן מופיעה עין המוכנה לניתוח.ראשית, נבחן את המבנים האנטומיים שישמשו כנקודות ציון במהלך הפרוצדורה. אלו עיניים של בעל חיים דלול. כאן נמצא העצב האופטי בחלק האחורי של העין ממול.זוהי הקרנייה. הקשת נראית דרך הקרנייה. האזור הלבנבן בחלק האחורי של העין הוא הלובנה.לפיכך, אזור זה נקרא למחיצה בין הקרנית לסקלרה. השלב הראשון של הניתוח הוא הסרת רקמות עודפות, כגון רקמת חיבור של השרירים והעצב האופטי. לאחר מכן, יש להסיר את הקרנית באמצעות חיתוך מעגלי.בשלב זה, ניתן להוציא את העדשה, מה שיוביל לקבלת גביע עיני חלול. ארבעת החתכים הבאים מבוצעים מקו ההפרדה בין הקרנית ללחמית לכיוון ראש העצב האופטי. המבנה שמתקבלresemble לפרח בעל ארבעה עלי כותרת.כל אחד מארבעה עלי כותרת אלו נחתך לאחר מכן במרכזו, מה שיוצר מבנה הדומה לפרח בעל שמונה עלי כותרת. בשלב זה, ה-I עלול להתעקם באזורים מסוימים בשל טבעו הכדורי. כדי להתגבר על כך ולהשיג הרכבה שטוחה יותר לחור, ניתן לבצע שמונה חתכי

dissection-mouse-eye-for-whole-mount-retinal-pigment

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הטכניקה לנתיחה מדגים הוצאת הקרביים של הזגוגית, הרשתית, ואת העדשה מהעין העכבר, הפרדה על ידי צנטריפוגה, ואפיון עם מבחני חלבון.

הוצאת הקרביים של הזגוגיות עכבר רשתית עבור ניתוח proteomic

טכניקת הנתיחה ממחישה enucleation של עין העכבר לקיבוע רקמות כדי לבצע phenotyping במסכי תפוקה גבוהה.

Enucleation עיני העכבר לphenotyping מרחוק תפוקה גבוהה

סרטון זה מתאר פרוטוקול לבידוד גביע הרשתית ללא שכבות הכיסוי החיצוניות מגלגל העין של עכבר. רקמת הרשתית המחולצת יכולה לסייע בחקר מסלולים מטבוליים שונים המתרחשים בתאי הרשתית.

מיצוי רשתית מעכבר: הליך כירורגי להשגת רשתית שלמה מעין העכבר

הפרוטוקול המתואר כאן מיועד להערכה מבנית של תכשיר רשתית שלם. זה כולל תיאורים של דיסקציה של רקמות, הרכבה על תוספת ממברנה פוליטטרפלואורואתילן הידרופילית (PTFE), העמסת בולוס עם סמנים פלואורסצנטיים, והשוואה של קיבוע עם קרבודימיד ופרפורמלדהיד לניתוח אימונוהיסטוכימי של רכיבים תאיים וסינפטיים.

פרוטוקול אופטימלי עבור רשתית Wholemount הכנה להדמיה ואימונוהיסטוכימיה

דו ח זה מתאר שיטות מקיפות של הכנת העכבר הקפוא מקטעים רשתית עבור אימונוהיסטוכימיה (IHC).  השיטות שתוארו כוללות ניתוח של הספל האחורי העינית, קיבעון הפרפורמלדהיד, הטבעה של טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) מדיה ורקמות כיוון, הסרת וכתמים חיסוני.

הכנת שאיפה של העכבר רשתית-סעיפים עבור אימונוהיסטוכימיה

פרוטוקול זה, אשר דווח במקור על ידי פרננדז-Godino ואח '. בשנת 20161, מתאר שיטה לבודד ביעילות ותרבות העכבר RPE תאים, אשר יוצרים מונולייר RPE פונקציונלי מקוטב בתוך שבוע על לוחות Transwell. ההליך לוקח בערך 3 שעות.

ניתוח יעיל ותרבות של תאי אפיתל פיגמנט רשתית העכבר הראשי

מאמר זה מציג פרוטוקול למיקרו-דיסקציה עינית במכרסמים. התהליך כולל את האינקולציה של גלגל העין יחד עם הממברנה הניקטיבית (כלומר, העפעף השלישי). לאחר מכן מתבצעת הפרדה של המשקפיים האחוריים והקדמיים.

מיקרודיסקציה של עין המכרסם

מודלים של עכברים יכולים להיות כלים שימושיים לחקר הביולוגיה של אפיתל פיגמנטי ברשתית (RPE). נקבע כי עכברים יכולים לפתח מערך של פתולוגיות RPE. כאן, אנו מתארים פרוטוקול פנוטיפ כדי להבהיר ולכמת פתולוגיות RPE בעכברים באמצעות אור, אלקטרונים הולכה ומיקרוסקופ קונפוקלי.

פרוטוקול להערכה וכימות של פתולוגיות אפיתל פיגמנטי ברשתית במודלים עכבריים של ניוון מקולרי הקשור לגיל

אפיתל פיגמנט ברשתית (RPE) פועל כמחסום מכריע בין הכורואיד לרשתית, ומקדם את בריאותם ותפקודם של סוגי תאי רשתית, כגון פוטורצפטורים. במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול פשוט ויעיל לבידוד וטיפוח RPE של מורין בוגר.

שיטה פשוטה לבידוד ותרבית של תאי אפיתל פיגמנט ברשתית מעכברים בוגרים

פרוטוקול זה מתאר את ההליך לבידוד רשתית העכבר בהרכבה שלמה וביצוע immunostaining כדי לתייג את כל תאי גנגליון הרשתית (RGCs). התהליך מלווה בהדמיה וספירה אוטומטית של RGCs באמצעות תוכנה מבוססת בינה מלאכותית, המספקת שיטה פשוטה, מהירה ומדויקת לכימות RGCs בכל רשתית העכבר.

Immunostaining בהר שלם וספירה אוטומטית של תאי גנגליון רשתית עכבר

מתואר פרוטוקול להכנת הקפאות רשתית של עכברים וביצוע צביעה חיסונית על קולטני אור. מאמר זה מאפשר לחוקרים לייצר באופן עקבי חלקים קפואים ברשתית של עכברים עם מורפולוגיה שמורה היטב ותוצאות צביעה חיסונית באיכות גבוהה.

הקפאה וצביעה חיסונית של רשתית העכבר

למדו את שיטת ניתוח העין בעכבר לקבלת הרכבה שלמה של האפיתל הפיגמנט הרשתית. טכניקה זו מאפשרת חקר התפתחות הרשתית ומחלות עיניים בחיות מודל.

Dissection העין עכבר על הר שלם של האפיתל פיגמנט רשתית

גלה סרטונים נוספים