Campionamento di singole cellule mediante microdissezione a cattura laser: una tecnica per raccogliere cellule bersaglio da una popolazione cellulare eterogenea

La microdissezione a cattura laser aiuta a procurare una singola cellula bersaglio da una miscela cellulare preparata su un vetrino. Inizia prendendo un vetrino adatto rivestito con una membrana biochimicamente inerte permeabile ai raggi UV sulla sua superficie. Esporre il vetrino alla luce UV per renderlo più idrofilo per una migliore aderenza cellulare.

Assemblare il vetrino in un apparecchio per citocentrifuga. Aggiungere la sospensione cellulare sulla porta dell'imbuto dell'apparato. Citocentrifuga per consentire alla forza centrifuga di concentrarsi e depositare un monostrato di cellule su una piccola area del vetrino. Lasciare asciugare lo scivolo all'aria.

Posizionare il vetrino, con il lato del campione rivolto verso l'alto, sotto un microscopio di microdissezione laser. Definisce la regione che circonda la cella di interesse. Ora, focalizza il raggio laser per sezionare la regione contenente la cellula bersaglio insieme al rivestimento della membrana. Quindi, sfocare il raggio laser e pulsarlo per generare pressione. Questa energia catapulta la regione microsezionata nel tappo rovesciato di una provetta di raccolta preassemblata contenente un tampone posto sopra il vetrino.

Recuperare il tubo e chiudere il tappo. Ruotare la provetta per portare il tampone contenente la singola cellula bersaglio sul fondo della provetta. Conservare la provetta in frigorifero fino a ulteriori analisi.

Per la microdissezione laser, citocentrifugare tutti i 300 microlitri di sospensione cellulare su un vetrino rivestito di membrana a 300 x g per 5 minuti. Quindi, posizionare il vetrino rivestito su un microscopio in grado di eseguire la microdissezione laser. Quindi, pipettare 4,5 microlitri di miscela master di lisi cellulare nel tappo della provetta per PCR da 0,2 millilitri.

Posizionare il tappo sopra il campione e raccogliere una singola cellula mediante microdissezione laser. Subito dopo, verificare la presenza di cellule isolate nel tappo PCR. Rimuovere la provetta per PCR dal microscopio laser per microdissezione e chiudere la provetta. Raccogli tutto il liquido sul fondo del tubo con una breve centrifuga.

• Microdissection - The process of extracting a single cell from a mixed cell population.
• Cytocentrifuge Technique - A method which uses centrifugal force to focus cells onto a slide.
• Target Capture - The retrieval of a specific designated cell from a slide.
• Laser Capture Microdissection Microscope - An instrument purposed to select and extract a target cell from a tissue section.
• Cytocentrifugation Meaning - The connotation of concentrating and depositing cells on a slide using centrifugal force.

• The concept of microdissection entails selecting and isolating a specific cell from a mix (e.g., target capture).
• Cytocentrifuge technique is a process employing centrifugal force to deposit cells on a slide (e.g., cytocentrifugation).
• Laser capture microdissection microscope allows for precise selection and extraction of target cells (e.g., microdissection).
• In context with the experiment, these principles are implemented to isolate a single target cell on a slide for further analysis.

• What does microdissection entail and what role does target capture play in it?
• From the provided information, can you explain the cytocentrifuge technique?
• What is the use of a laser capture microdissection microscope in the process?

• Microdissection has practical applications in cell study and genome research (e.g., biotechnology).
• These techniques contribute to the clinical and research aspects of healthcare industry (e.g., pathology).
• Isolation of specific cells has broader implications for disease understanding and treatment (e.g., cancer research).
• Advancements in efficient cell isolation techniques drive scientific innovation in cell and genome studies.