Che cos'è la microdissezione di cattura laser?

È una tecnica utilizzata per isolare cellule specifiche da una miscela utilizzando un laser.

Come assiste la luce UV in questo processo?

La luce UV rende il vetrino più idrofilico, migliorando l'adesione cellulare.

Qual è il ruolo della citocentrifugazione?

Concentra le cellule in un monostrato sul vetrino per una dissezione più facile.

Questo metodo può essere utilizzato per qualsiasi tipo di cellula?

Sì, purché le cellule possano aderire al vetrino e siano adatte alla dissezione laser.

Quali sono le applicazioni delle cellule isolate?

Le cellule isolate possono essere utilizzate per varie analisi, incluse studi genetici e biochimici.

Campionamento di singole cellule mediante microdissezione a cattura laser: una tecnica per raccogliere cellule bersaglio da una popolazione cellulare eterogenea

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 views • 2:30 min • April 30th, 2023

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La microdissezione a cattura laser aiuta a procurare una singola cellula bersaglio da una miscela cellulare preparata su un vetrino. Inizia prendendo un vetrino adatto rivestito con una membrana biochimicamente inerte permeabile ai raggi UV sulla sua superficie. Esporre il vetrino alla luce UV per renderlo più idrofilo per una migliore aderenza cellulare.

Assemblare il vetrino in un apparecchio per citocentrifuga. Aggiungere la sospensione cellulare sulla porta dell'imbuto dell'apparato. Citocentrifuga per consentire alla forza centrifuga di concentrarsi e depositare un monostrato di cellule su una piccola area del vetrino. Lasciare asciugare lo scivolo all'aria.

Posizionare il vetrino, con il lato del campione rivolto verso l'alto, sotto un microscopio di microdissezione laser. Definisce la regione che circonda la cella di interesse. Ora, focalizza il raggio laser per sezionare la regione contenente la cellula bersaglio insieme al rivestimento della membrana. Quindi, sfocare il raggio laser e pulsarlo per generare pressione. Questa energia catapulta la regione microsezionata nel tappo rovesciato di una provetta di raccolta preassemblata contenente un tampone posto sopra il vetrino.

Recuperare il tubo e chiudere il tappo. Ruotare la provetta per portare il tampone contenente la singola cellula bersaglio sul fondo della provetta. Conservare la provetta in frigorifero fino a ulteriori analisi.

Per la microdissezione laser, citocentrifugare tutti i 300 microlitri di sospensione cellulare su un vetrino rivestito di membrana a 300 x g per 5 minuti. Quindi, posizionare il vetrino rivestito su un microscopio in grado di eseguire la microdissezione laser. Quindi, pipettare 4,5 microlitri di miscela master di lisi cellulare nel tappo della provetta per PCR da 0,2 millilitri.

Posizionare il tappo sopra il campione e raccogliere una singola cellula mediante microdissezione laser. Subito dopo, verificare la presenza di cellule isolate nel tappo PCR. Rimuovere la provetta per PCR dal microscopio laser per microdissezione e chiudere la provetta. Raccogli tutto il liquido sul fondo del tubo con una breve centrifuga.