Iniezione intraprostatica di cellule tumorali: una tecnica per fornire cellule tumorali per stabilire un modello murino di cancro alla prostata ortotopico

L'iniezione intraprostatica di tumore ortotopico eroga cellule tumorali corrispondenti all'istotipo del tessuto prostatico direttamente nella ghiandola prostatica dell'animale ricevente.

Per iniziare, prepara un topo maschio anestetizzato in posizione supina. Praticare un'incisione addominale sulla linea mediana e sezionare la muscolatura interna per esporre la cavità addominale. Individuare uno dei lobi prostatici anteriori. Questi lobi della prostata sono attaccati alla curvatura minore delle vescicole seminali e si trovano vicino alla vescica urinaria.

Ora, iniettare una sospensione raffreddata di cellule tumorali della prostata mescolate con la matrice della membrana basale desiderata nell'asse lungo del lobo prostatico anteriore. Garantire l'erogazione completa della sospensione cellulare e ritrarre delicatamente l'ago. Lascia che la matrice si solidifichi e incastri le cellule all'interno.

Successivamente, riposizionare il lobo prostatico insieme alla vescicola seminale nella cavità addominale. Sutura l'incisione chirurgica. Consenti al mouse di riprendersi. Controllare il topo settimanalmente per osservare la crescita di tumori ortotopici all'interno del lobo prostatico anteriore.

Dopo aver confermato la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita, applicare un unguento sugli occhi del topo e radere tutto il pelo dall'addome dell'animale. Sterilizzare la pelle esposta con tre cicli di scrub chirurgico utilizzando tamponi sterili non aderenti seguiti da salviettine imbevute di alcol sterili. Quando la pelle è asciutta, posizionare il mouse in posizione supina su una superficie pulita sopra un termoforo direttamente sotto l'obiettivo di un microscopio operatorio pulito e coprire l'animale con un telo sterile con un piccolo foro ritagliato sopra l'addome.

Praticare un'incisione di 1 centimetro nella pelle esterna e nella muscolatura addominale interna lungo la linea mediana dell'addome superiore al pene e alle ghiandole prepuziali. Individuare una delle vescicole seminali bilaterali e i lobi prostatici anteriori attaccati che sono tipicamente posteriori, laterali e leggermente superiori alla vescica. Chiedi a un assistente di mescolare la soluzione di cellule tumorali Myc-CaP matrigel con un pipettaggio delicato e di aspirare lentamente 30 microlitri di cellule in un ago da 28 gauge collegato a una siringa da 50 microlitri.

Quindi, utilizzando la pinza per tessuti Graefe, sollevare delicatamente la punta di una vescicola seminale per creare tensione sul tessuto senza perforare la vescicola e inserire con cura lo smusso dell'ago parallelamente all'asse lungo del lobo prostatico anteriore. Iniettare lentamente l'intero volume di cellule nel lobo, seguito da una lenta retrazione dell'ago per evitare perdite.

Una buona iniezione sarà evidente da un ingorgo del lobo prostatico interno. Con attenzione e costanza, mantenere la vescicola seminale e il lobo prostatico iniettato all'esterno del topo per circa 30 secondi per consentire al matrigel di solidificarsi parzialmente all'interno del lobo. Utilizzare un applicatore sterile con punta in poliestere per raccogliere eventuali perdite di soluzione cellulare nell'addome per prevenire lo sviluppo di tumori non ortotopici.

Un'accurata iniezione intraprostatica è fondamentale per lo sviluppo del tumore ortotopico. Prestare particolare attenzione per evitare di perforare la vescicola seminale, iniettare lentamente la sospensione delle cellule tumorali e raccogliere eventuali perdite di cellule aumenterà il successo di questa procedura.

Ora, rimetti delicatamente la vescicola seminale e il lobo iniettato nell'addome senza esercitare pressione sul lobo e sostituisci eventuali tessuti esternalizzati. Utilizzando suture ad ago a taglio inverso riassorbibili 5-0 vicryl, chiudere la muscolatura addominale interna con punti continui, seguiti dalla chiusura della pelle addominale esterna con punti interrotti utilizzando suture ad ago da taglio inverso riassorbibili in monofilamento di nylon 4-0

Quindi, somministrare l'analgesia post-operatoria e posizionare il topo in una gabbia senza lettiera a metà su un termoforo con monitoraggio fino al completo recupero.

• Prostate Cancer Model - A lab representation to study the progression & treatment of prostate cancer.
• Intraprostatic Injection - Technique of injecting medication or solution directly into the prostate.
• Matrigel - A gelatinous protein matrix used in tumor cell research.
• Orthotopic Tumor Model - Study model wherein tumor cells are implanted in their original organ.
• Seminal Vesicles - Male reproductive glands located near the prostate, integral to the injection procedure.

• Introduce Prostate Cancer Model – Biological method to examine prostate cancer (e.g., intraprostatic injection).
• Key Concepts – Involve steps like shaving, sterilizing, incising and suturing (e.g., prostate biopsy procedure video).
• Underlying Mechanisms – Seminal vesicles and anterior prostate lobes are involved (e.g., prostate cancer real images).
• Connect to Experiment – Demonstrate how injections ensure successful tumor implantation within prostate.

• What is intraprostatic injection used for in a prostate cancer model?
• How is the matrigel cancer cell solution involved in the procedure?
• Why is careful handling of seminal vesicles and prostate lobes crucial in this experiment?

• Practical Applications – Used in surgical training and cancer treatment research (e.g., prostate cancer injection).
• Industry Impact – Benefits medical industries, particularly oncology and urology (e.g., injection for prostate cancer).
• Societal Importance – Advancement in prostate cancer treatment techniques (e.g., injection prostate).
• Link to Scientific Advancements – Continuous improvement of prostate cancer models for research.