JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 4:03 min. • April 30th, 2023
Inizia con un campione di tessuto tumorale della prostata. Risospenderlo in un tampone di lisi raffreddato per avviare la lisi cellulare. Utilizzare un omogeneizzatore per abbattere ulteriormente le strutture tissutali e rilasciare i loro componenti intracellulari. Sonicare il campione su ghiaccio per garantire la completa lisi cellulare e tagliare il DNA per evitare interferenze durante l'elaborazione dei peptidi. Riscaldare il lisato per interrompere la struttura terziaria delle proteine e dispiegarsi.
Gli agenti riducenti nel tampone scindono i legami disolfuro tra i residui di cisteina. Successivamente, gli agenti alchilanti nel tampone alchilano gruppi tiolici liberi di cisteine ridotte per prevenire la riformazione del legame disolfuro. Gli agenti denaturanti aggiuntivi nel tampone facilitano la denaturazione controllata e l'ulteriore dispiegamento delle proteine.
Centrifuga per pellettizzare i detriti tissutali ed eventuali contaminanti. Raccogliere il surnatante contenente la miscela proteica in una provetta nuova. Aggiungere l'enzima lisil endopeptidasi per scindere i legami peptidici nelle proteine all'estremità C dei residui di lisina, formando grandi peptidi. Inoltre, t
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