JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Ricerca sul cancro
0 visualizzazioni • 4:50 min. • April 30th, 2023
La fosforilazione di specifici residui di aminoacidi, come la tirosina, genera fosfopeptidi che svolgono un ruolo critico nella regolazione di diverse vie di segnalazione cellulare. Il loro studio consente l'identificazione di potenziali biomarcatori per la terapia del cancro.
Per isolare i fosfopeptidi, iniziare con una polvere liofilizzata di peptidi purificati estratti dal tessuto tumorale. Risospendere la polvere in un tampone adatto per preparare una sospensione peptidica uniforme. Mantenere un pH neutro per garantire la stabilità dei peptidi.
Preparare un impasto liquido costituito da perle di idrogel coniugate a specifici anticorpi anti-fosfopeptide nel tampone desiderato. Aggiungere l'impasto liquido di perline alla sospensione peptidica. Gli anticorpi immobilizzati sulle perle riconoscono e si legano ai loro specifici residui di amminoacidi fosforilati all'interno dei fosfopeptidi, formando complessi.
Centrifugare la miscela per raccogliere i complessi fosfopeptide-perlina nel pellet. Rimuovere il surnatante contenente peptidi non legati o fosfopeptidi non specifici. Aggiungere un tampone di eluizione a basso pH adatto ai complessi e incubare. Il pH basso indebolisce l'int
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