Estrazione di rene intatto dal topo: una tecnica per ottenere rene senza capsula renale da modelli murini

Nei roditori, il rene ha un rivestimento esterno fibroso protettivo chiamato capsula renale e uno strato di grasso perinefrico sopra di esso. Per estrarre il rene murino senza gli strati circostanti, iniziare posizionando un topo soppresso in posizione supina su un letto chirurgico.

Incidere la pelle addominale e gli strati muscolari. Continuare a praticare incisioni longitudinali fino a quando la cavità addominale non è esposta. Quindi, individua gli intestini e sollevali leggermente. Taglia sotto gli intestini e rimuovili dal corpo del topo per esporre i reni.

Quindi, trova l'uretere e taglia i tessuti connettivi sottostanti in modo che i reni si separino dalla cavità addominale. Asportare entrambi i reni individualmente. Mettere il rene estratto in una capsula contenente un tampone ghiacciato e osservarlo al microscopio da dissezione.

Ora, rimuovi il grasso perinefrico dal rene per visualizzare la pelvi renale, una parte dilatata dell'uretere simile a un imbuto. Tagliare una parte della pelvi renale dalla base per rimuovere i resti dell'uretere.

Infine, perforare superficialmente la capsula renale fibrosa esterna. Utilizzando l'apertura creata, staccare con cura l'intera capsula renale dalla superficie del rene. Questo aiuta a rimuovere la ghiandola surrenale - una ghiandola endocrina attaccata alla capsula renale - e ottenere un rene intatto.

Usando una pinza per tessuti interni e forbici per dissezione interna, pizzica gli intestini e sollevali dalla parete addominale. Contemporaneamente, tagliare la parte inferiore dell'intestino dal corpo in corrispondenza del duodeno prossimale e del colon distale per accedere allo spazio retroperitoneale contenente i reni.

Pizzicare delicatamente e sollevare l'estremità distale dell'uretere con una pinza per tessuti. Usando le forbici da dissezione, tagliare sotto l'uretere pizzicato verso il rene fino a quando non si è liberato dal tessuto connettivo circostante. Una volta che i reni sono esposti, estrarli singolarmente.

Riempire un piatto rivestito di elastomero siliconico con una soluzione di KRB ghiacciata. Trasferire il rene nella capsula di dissezione e assicurarsi che sia completamente sommerso. Utilizzare forbici a molla sottili e pinze interne per rimuovere il tessuto adiposo dalla base del rene per esporre la pelvi renale distale o RP e l'uretere prossimale.

Rimuovere l'uretere prossimale e una parte dell'RP distale dalla base utilizzando forbici a molla fine e pinze. Forare la capsula renale esterna con una pinza a punta fine, inclinando le punte lontano dal corpo del rene. Usando una pinza con ciascuna mano, pizzicare le estremità libere della capsula e staccarle fino a rimuovere completamente la membrana della capsula renale rimanente.