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0 visualizzazioni • 3:14 min • April 30th, 2023
Per preparare sezioni sottili di un rene di topo, per prima cosa, procurati un rene di topo appena raccolto. Trasferire il rene su una carta da filtro e asciugarlo per garantire un'adesione ottimale al portacampione del vibratomo.
Quindi, montare il rene, con l'uretere rivolto verso il basso, utilizzando un sottile strato di colla cianoacrilica applicata alla base del supporto del campione del vibratomo, fissando il rene in posizione verticale. Trasferire il portacampioni su un vassoio tampone.
Riempire la vaschetta con un tampone adatto per immergere completamente la superficie superiore del rene. Un bagno di ghiaccio circonda il vassoio per evitare danni ai tessuti dovuti all'accumulo di calore durante l'affettatura. Impostare la lama del vibratomo su un angolo, una velocità e un'ampiezza appropriati. Regolare il parametro dello spessore per ottenere sezioni di tessuto dello spessore desiderato.
Durante il funzionamento, la lama vibra lateralmente e avanza, penetrando attraverso il campione di tessuto. La lama vibrante consente il sezionamento con meno pressione e riduce al minimo la deformazione del tessuto, generando sezioni uniformi di tessuto renale di interesse mantenendo la morfologia del tessuto.
Nel frattempo, assemblare una piastra a più pozzetti contenente un'adeguata soluzione tampone refrigerata per imitare le condizioni fisiologiche del tessuto. Ora, trasferisci le sezioni di tessuto affettate nel tampone. Infine, conservare le sezioni di tessuto a bassa temperatura fino a un'ulteriore analisi a valle.
Usa una pinza smussata per afferrare delicatamente e rimuovere il rene preparato dalla soluzione di KRB ghiacciata. Posizionare immediatamente il rene su carta assorbente per circa 2-4 secondi per rimuovere l'umidità esterna in eccesso. Arrotolare delicatamente il rene sulla carta assorbente per assicurarsi che tutti i lati del parenchima si siano asciugati in modo che vi sia un'adesione ottimale del rene allo stadio di vibratomo.
Applicare immediatamente un sottile strato di colla cianoacrilica alla base della piastra del campione di vibratomo e utilizzare una pinza smussata per posizionare il rene, con l'uretere rivolto verso il basso, sull'area ricoperta di colla. Applicare delicatamente una pressione verso il basso sulla parte superiore del rene con il bordo piatto della pinza per circa 10-20 secondi per asciugare la colla.
Fissare saldamente la piastra del campione sul fondo del vassoio tampone e regolare il livello della soluzione di KRB in modo che la parte superiore del rene sia completamente immersa. Per il sezionamento automatico del vibratomo, selezionare le posizioni iniziale e finale del ciclo di taglio della lama del vibratomo, da 0,5 a 1 centimetro lontano dal rene, per garantire che l'intero piano del rene venga sezionato.
Avviare il processo di taglio automatico, assicurandosi che la lama entri in contatto con il rene. Usando una pinza, raccogliere le sezioni che vengono liberate dal rene e trasferirle immediatamente nei singoli pozzetti.