Isolamento dei glomeruli: una tecnica per ottenere glomeruli intatti dal rene murino

Nei reni dei vertebrati, i nefroni sono costituiti da più glomeruli - una fitta rete di vasi sanguigni - che svolgono un ruolo primario nella filtrazione dei rifiuti dal corpo.

Per isolare i glomeruli, inizia prendendo un rene di topo appena sezionato. Usa una pinza per staccare la capsula renale dal rene e posiziona il rene pulito in un nuovo piatto di coltura. Ora, posiziona il piatto sul ghiaccio per evitare la degradazione dei reni. Tritare il rene in piccoli pezzi.

Quindi, risospendere i pezzi di rene tritati in una soluzione tampone adatta. Filtrare la sospensione tissutale attraverso un filtro a maglie di grandi dimensioni e raccogliere il flusso in un piatto fresco. Ripetere questo passaggio ancora un paio di volte, diminuendo progressivamente le dimensioni delle maglie ogni volta, fino a quando i glomeruli si dissociano dai frammenti renali.

Infine, lavare il filtro con il terreno di coltura desiderato per raccogliere i glomeruli più piccoli intrappolati mentre i frammenti di rene rimangono nel filtrato. Trasferire i glomeruli su una piastra di fissaggio ultrabassa. Visualizza la lastra utilizzando un microscopio a luce invertita.

Con l'aiuto di una micropipetta, catturare