Modellazione del tumore ortotopico della vescica in un modello murino: una procedura per la somministrazione intravescicale di cellule tumorali nella vescica murina

L'instillazione intravescicale facilita la consegna delle cellule tumorali nella vescica urinaria di un animale ricevente. Per iniziare, prepara un topo femmina anestetizzato in posizione supina su un termoforo per regolarne la temperatura corporea. Svuotare la vescica dall'urina.

Quindi, assemblare un catetere collegato a una siringa contenente poli-L-lisina o soluzione PLL. Lubrificare la punta del catetere per garantire un inserimento uretrale regolare e ottenere l'accesso alla vescica. Dopo l'inserimento, iniettare lentamente la soluzione di PLL nella camera d'aria.

La somministrazione lenta di PLL previene il reflusso vescico-ureterale - il riflusso di urina dalla vescica agli ureteri e ai reni. Posizionare un tappo sul catetere per evitare il deflusso prematuro. Le molecole di PLL iniettate con carica positiva interagiscono e aderiscono al rivestimento di glicosaminoglicani caricato negativamente sulla parete interna della vescica.

Rimuovere il catetere e liberare la vescica dalla soluzione PLL non legata e dall'urina. Utilizzando un altro gruppo catetere-siringa, iniettare lentamente una sospensione di cellule tumorali raffreddate nella vescica per prevenire il reflusso vescico-ureterale e il conseguente impianto di cellule nei reni. Fissare il tappo sul catetere.

L'alterata carica superficiale dello strato di glicosaminoglicani migliora la sua interazione elettrostatica con le cellule tumorali, facilitandone l'adesione. Rimuovere il catetere e liberare la vescica dalle cellule tumorali e dalle urine non aderenti. Nel tempo, le cellule tumorali impiantate all'interno della vescica proliferano per stabilire tumori primari.

Una volta che una femmina di topo è stata anestetizzato, fornire idratazione mediante un'iniezione intraperitoneale della soluzione di Hartmann a 0,1 millilitri per 10 grammi di peso corporeo. Ripetere l'operazione ogni una o due ore durante l'anestesia.

Quindi, applicare un unguento oftalmico sterile su entrambi gli occhi. Riapplicare secondo necessità. Quindi, posiziona il mouse supino su tovaglioli di carta sopra un termoforo per mantenere la temperatura corporea. Quindi, fissa le zampe posteriori con del nastro adesivo. Ora, applica una leggera pressione sulla regione addominale inferiore e raccogli l'urina in un tubo da 1,5 millilitri.

Quindi, caricare una siringa da 1 millilitro con PLL sterile e collegare un catetere IV calibro 24 con lo stiletto dell'ago rimosso. Applicare lubrificante sulla punta del catetere. Quindi, inserire il catetere nell'uretra e, utilizzando una pinza, guidarlo verso la vescica. Fermarsi quando si avverte resistenza. Quindi, espellere lentamente 50 microlitri di PLL a una velocità di 10 microlitri ogni 20 secondi per evitare il reflusso vescico-ureterale.

Ora, lasciare il catetere nella vescica per 20 minuti con un tappo per evitare il deflusso. Dopo 20 minuti, rimuovere il catetere e liberare la vescica da qualsiasi contenuto premendo delicatamente sul basso addome. Quindi, utilizzando una siringa da 1 millilitro, sciacquare il contenuto rimanente dal catetere.

A questo punto, miscelare accuratamente le cellule MB49-PSA mediante pipettaggio e caricarle in una siringa da 1 millilitro. Collegare il catetere e lubrificarlo come prima. Inserire il catetere nella vescica come prima e iniziare con l'iniezione delle cellule utilizzando un'espulsione graduale di 10 microlitri per 20 secondi. Quindi, attendi un'ora.

Dopo un'ora, rimuovere il catetere e liberare la vescica da qualsiasi contenuto. Quindi, rilascia il mouse. Posizionarlo sul lato ventrale e rivitalizzarlo con un'iniezione di atipamezolo. Ora, monitora il topo fino a quando non riacquista la decubito sternale e poi rimettilo nella sua gabbia di casa.