Somministrazione di plasmidi di DNA nell'urotelio della vescica di topo: una procedura basata sull'elettroporazione per erogare in modo efficiente plasmidi di DNA nelle cellule uroteliali della vescica murina per generare modelli geneticamente modificati

Per iniziare, prepara una femmina di topo anestetizzata in posizione supina. Assicurarsi che la vescica sia completamente vuota. Attraverso l'apertura uretrale, inserire un catetere lubrificato. La lubrificazione favorisce il passaggio uretrale regolare per l'ingresso nella vescica.

Dopo il cateterismo, praticare un'incisione addominale e sezionare la muscolatura interna per esporre la vescica. Quindi, pipettare una sospensione di plasmidi di DNA mescolati con un colorante adatto nell'estremità esterna del catetere. Questi plasmidi di DNA codificano per un gene reporter fluorescente.

Collegare una siringa al catetere e spingerla per erogare la soluzione plasmidica nella vescica. Le molecole di colorante iniettate colorano la vescica, confermando il successo della somministrazione della soluzione plasmidica. Rimuovere il gruppo catetere e serrare l'orifizio uretrale esterno per evitare il deflusso della soluzione plasmidica.

Ora, pizzicare la vescica utilizzando due elettrodi collegati a un generatore di elettroporazione. Applicare impulsi elettrici di tensione appropriata per un periodo desiderato alla vescica. L'esposizione dell'urotelio vescicale, il rivestimento più interno dell