Isolamento degli esosomi: una tecnica di ultracentrifugazione basata sulla densità che utilizza un cuscino di saccarosio per separare gli esosomi dai terreni condizionati delle cellule in coltura

Gli esosomi - vescicole di dimensioni nanometriche legate alla membrana che trasportano biomolecole funzionali - sono attivamente secreti dalla maggior parte dei tipi di cellule e possono essere isolati da surnatanti di colture cellulari in vitro. Per isolare gli esosomi, in primo luogo, raccogliere il surnatante o il terreno condizionato da una coltura cellulare di interesse. I terreni condizionati conterrebbero esosomi, proteine, detriti cellulari e vescicole.

Centrifugare il terreno per pellettare i detriti cellulari. Raccogli il surnatante contenente esosomi e filtralo attraverso filtri cellulari per rimuovere le vescicole più grandi. Trasferire un volume specifico del mezzo filtrato in una provetta nuova. Successivamente, mescola le concentrazioni appropriate di saccarosio e ossido di deuterio per preparare un cuscino di saccarosio, un gradiente discontinuo di saccarosio.

Aggiungere un volume specifico della soluzione a cuscino di saccarosio nel tubo contenente il terreno; la soluzione forma uno strato separato sul fondo. A questo punto, centrifugare la provetta ad alta velocità. Il cuscinetto di saccarosio facilita la migrazione degli esosomi dal terreno alla soluzione di sac