Isolamento di cellule renali mure: una tecnica per isolare e generare colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali

Per isolare le cellule epiteliali tubulari renali o TEC, iniziare prendendo un rene di topo appena isolato in una capsula di Petri. Staccare la capsula renale - il sottile strato esterno che circonda il rene - e rimuovere il midollo o la parte più interna del rene, lasciando la corteccia contenente il tubulo e le cellule epiteliali tubulari.

Tritare le parti renali rimanenti in piccoli pezzi e incubarli in un tampone di digestione caldo contenente l'enzima collagenasi. La collagenasi scompone la proteina del collagene che tiene insieme i tessuti renali, rilasciando i tubuli renali e le cellule renali in sospensione.

Filtrare la sospensione per rimuovere i tessuti renali non digeriti. Quindi, aggiungere al filtrato terreni di coltura pre-refrigerati. La temperatura più bassa neutralizza la collagenasi e blocca l'ulteriore digestione dei tessuti. Centrifugare il filtrato a bassa velocità per consentire ai tubuli più densi e alle cellule tubulari di depositarsi mentre altri tipi di cellule e impurità rimangono sospesi.

Rimuovere questa frazione surnatante indesiderata e aggiungere terreni di coltura per risospendere il pellet. Seminare la sospensione in un piatto di coltura rivestito