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0 visualizzazioni • 3:36 min. • April 30th, 2023
Per fornire il DNA plasmidico direttamente nelle cellule renali del topo, iniziare posizionando un topo anestetizzato in posizione laterale. Prepara il topo rimuovendo la pelliccia dorsale dal lato. Individuare un sito di incisione appropriato nel fianco sinistro, sotto la gabbia toracica.
Fai una piccola fessura nella pelle e negli strati muscolari sottostanti. Quindi, applicare una leggera pressione sulla cavità addominale per esporre il rene attraverso il sito dell'incisione. Rimuovere parzialmente il tessuto adiposo perinefrico sovrapposto per visualizzare la pelvi renale.
Ora, prendete una siringa contenente DNA plasmidico in un tampone di consegna idrodinamico. Inserire l'ago direttamente nella pelvi renale, una porzione triangolare e dilatata dell'uretere nel rene. Iniettare rapidamente la soluzione plasmidica in modo che il DNA raggiunga direttamente il parenchima renale, la parte funzionale del rene che filtra il sangue.
L'erogazione rapida di un grande volume di fluido attraverso la pelvi renale crea un'alta pressione, creando pori transitori nella membrana plasmatica delle cellule parenchimali renali. Questo facilita l'ingresso dei plasmidi nelle cellule. Alla fine, questi pori si chiudono, intrappolando i plasmidi all'interno delle cellule.
Infine, ritrarre l'ago e riportare il rene nella cavità addominale. Sutura la pelle e gli strati muscolari nel sito di incisione.
Indossare guanti chirurgici sterili e, partendo dal lato dell'incisione, tamponare l'animale con un nuovo tampone di clorexidina/alcol tre volte con un movimento circolare. Ora, individua il sito di incisione. Pizzica la pelle con una pinzetta e, usando le forbici, taglia lo strato di pelle a circa 1 centimetro dalla colonna vertebrale sotto la gabbia toracica. Fai un altro taglio centrale sotto nello strato muscolare. Individua il rene e, senza toccarlo, esponilo delicatamente dalla cavità addominale applicando una leggera pressione costante sull'addome con le dita.
Esporre il rene a volte è difficile. Applicare una leggera pressione sull'addome e sulla colonna vertebrale per evitare di danneggiare la milza. Se escono organi diversi dal rene, rimetterli delicatamente nella cavità del corpo usando una pinza chiusa, se necessario.
Quindi, separa delicatamente il rene dal grasso circostante quel tanto che basta per visualizzare la pelvi renale, che può essere vista come un piccolo punto bianco. Dopo aver visualizzato la pelvi renale, utilizzare una pinza chiusa per spingere verso il basso il lato destro del rene in modo che la pelvi renale rimanga in vista. Quindi, afferrare la siringa da insulina carica con la mano destra tenendola parallela alla superficie di lavoro e inserire con cautela l'ago nella pelvi renale.
Una volta inserito l'ago, iniettare rapidamente la soluzione entro 3 secondi. Lasciare che l'ago rimanga in posizione per circa 10 secondi per evitare il riflusso della soluzione. Quindi, rimuovere l'ago lentamente e con attenzione e riportare l'organo nella cavità addominale allungando delicatamente il sito di incisione utilizzando una pinza chiusa. Ora, sutura lo strato muscolare con suture riassorbibili 5-0 e posiziona da 2 a 4 nodi indipendenti. Allo stesso modo, sutura lo strato cutaneo con suture di nylon non assorbibili 5-0 o 6-0 e posiziona da 2 a 4 nodi indipendenti.