Name: Isolamento di cellule cardiache funzionali immunitario (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-05T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Impara a isolare cellule immunitarie cardiache funzionali dal ratto usando HBSS per lavaggi pericardici. Questo metodo evita l'attivazione enzimatica e preserva la reattività cellulare per analisi successive.

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Questo lavoro è stato supportato da una UNCF-Merck tesi di laurea Science Research Fellowship (JLM), National Heart, Lung, and Blood Institute concede RO1-HL-62228 (JSJ) e RO1-HL-073990 (JSJ).

1. Preparazione della soluzione Balance Hanks 'Salt (HBSS) <ol><li> Autoclave 1 bicchiere di vetro L, 1000 mL cilindro graduato, e mescolare bar. </li><li> Ricostituire la soluzione polvere HBSS in autoclave L 1 bicchiere di vetro per il marchio di 900 ml con acqua bidistillata. </li><li> Mescolare soluzione HBSS con 3,4 g di sale Hepes Na + e regolare il pH a un valore compreso tra 7,35-7,41 utilizzando concentrato HCL o NaOH. </li><li> Una volta che il pH desiderato è stato raggiunto e rimane stabile, aggiungere 5 g di BSA per la soluzione a temperatura ambiente fino a quando la albumina è completamente sciolto. </li><li> Aggiungere 10 ml di acqua antibiotico, antimyotic, alla soluzione e bidistillata fino a quando il volume totale è di 1000 ml marchio. </li><li> Mescolare bene la soluzione. </li><li> Filtrare la soluzione HBSS e separare in tubi Falcon da 50 ml per un uso successivo. Tubi aggiuntivi possono essere congelati e utilizzati in un secondo momento. </li></ol> 2. Animal PREPARAZIOn - Inserimento del tubo tracheale <ol><li> Preparare un vassoio con strumenti e materiali necessari per l'inserimento di un tubo tracheale (ad esempio pinze, forbici, tubo tracheale, 3-0 sutura nera intrecciata, ventilatore per piccoli animali, ecc.) </li><li> Una volta che il ratto è completamente anestetizzato con un cocktail di ketamina / xylazina nel rapporto di 2 a 1 xylazina ketamina, radere l'addome, torace e gola del ratto. Per garantire che un profondo stato anestetico è stato raggiunto, pizzicare piedi del ratto e controllare per il ritiro pedale dell'arto. Assicurarsi che il ratto è profondamente anestetizzati prima di fare tutte le incisioni. </li><li> Posizionare il topo con la testa sollevata su un tagliere che è inclinato di 30 ° di inclinazione </li><li> Eseguire un'incisione cutanea a partire dalla metà dell'addome al di sotto della mandibola. Sezionare via i muscoli del triangolo anteriore del collo per esporre la trachea. </li><li> Posizionare un 3-0 sutura nero intrecciato con la trachea. </li><li> Fare un'incisione nella trachea tra gli anelli cartilaginei unod inserire il tubo tracheale. Legare saldamente la sutura per fissare il tubo tracheale per la trachea. </li><li> Collegare il tubo tracheale di un ventilatore piccolo animale. </li></ol> 3. Preparazione dello strumento per l'isolamento delle cellule immunitarie <ol><li> Preparare un vassoio con gli strumenti per la procedura di isolamento delle cellule immunitarie (ad esempio pinze, forbici, HBSS, tagliato morbido teflon 24 gauge Baxter intravascolare sopra l'ago rapido cath) </li><li> Preparare due siringhe 10cc, riempire una siringa con HBSS per introdurre il buffer nel sacco pericardico e prenotare l'altro per l'aspirazione delle celle contenenti HBSS. 3.2.1. Ridurre la punta in Teflon del calibro 24 Baxter intravascolare nel corso del rapido-cath ago (1,6 cm) da 1 / 2 a 3 / 4 della sua lunghezza originale per la procedura di isolamento. </li><li> Mettere tutte le siringhe, tamponi, e un vuoto da 15 ml tubo Falcon (per tenere il liquido estratto, una volta procedura è terminata) su ghiaccio. </li></ol> &lt;p class = "jove_title"&gt; 4. Cella di isolamento immunitario <ol><li> Fai una incisione sulla linea mediana della parete addominale (lungo la linea alba) fino a raggiungere il processo xifoideo. </li><li> Partendo un po 'lateralmente al processo xifoideo, fare incisioni bilaterali attraverso la gabbia toracica continua con un angolo verso l'ascella. Fare attenzione a non forare i polmoni, il cuore o pericardio. </li><li> Una volta che le incisioni su entrambi i lati dello sterno sono completi, sezionare via la membrana dal costole inferiori, il taglio laterale a mediale. Nota: Siate sempre consapevoli di dove il pericardio si collega al diaframma e lo sterno per evitare danni. Utilizzare il legamento falciforme come punto di riferimento per notare dove il pericardio è attaccato sul lato opposto della membrana. Inoltre, se il pericardio è tagliato, la capacità di isolare le cellule si perde. </li><li> Sollevare delicatamente un lato della gabbia toracica per esporre la cavità toracica e il cuore (ancora incapsulato dal pericardio).</li><li> Prendere la siringa riempita HBSS e trovare un punto nel sacco pericardico circa a metà strada tra lo sterno e il cuore (preferibilmente più rostrale rispetto caudale) e inserire la punta del Teflon accorciato rapido cath attraverso entrambi gli strati del pericardio. </li><li> Una volta che il catetere è a posto, procedere con delicatezza riempire lo spazio pericardico con 2 o 3 ml di tampone HBBS. Saprete immediatamente se il catetere è posizionato correttamente quando si nota lo spazio pericardico espansione. Se nessun riempimento è testimoniata, prelevare e riposizionare il rapido-cath. </li><li> Quando il sacco pericardico è pieno, prendere l'altra siringa da 10 cc e posizionare la punta indietro nel pericardio e iniziare aspirare il tampone. Il foro di entrata lo stesso può essere usato o un altro possono essere creati. Assicurarsi che la punta non arrivare troppo a ridosso delle mura del sacco pericardico, fornendo aspirazione, soprattutto sul lato inferiore del cuore. Ciò potrebbe portare a pungere il pericardio e la perdita di cellule contenenti cellules. </li><li> Mentre aspirare il tampone, la punta del catetere può essere spostato all'interno del sacco pericardico al fine di raccogliere tampone quanto più possibile. </li></ol> Nota: se nel farlo leggermente strappare il pericardio e fare il buco nella parte superiore del cuore più grande del foro originale, non fatevi prendere dal panico. Finché il pericardio circonda ancora abbastanza del cuore è ancora possibile eseguire un'altra lavata sopra il cuore anche se con una minore quantità di tampone. Per la raccolta di una quantità ottimale di cellule, 3-4 lavaggi sono necessari ulteriori. <ol start="9"><li> Posizionare il tampone estratto nei tubi Falcon che sono stati immessi sul ghiaccio. </li><li> Rimuovere cuore, polmoni, e / o qualsiasi altro tessuto, se necessario, per ulteriori studi. Dopo la raccolta delle cellule immunitarie e di altri tessuti, il topo deve essere rapidamente e umanamente eutanasia. </li><li> Centrifugare i campioni raccolti cellule immunitarie per 10 min a 200 gr a 4 ° C. Tenere sempre i tubi in ghiaccioquando non in uso. </li><li> Rimuovere il surnatante e ricostituire il pellet in 1 ml di tampone Hyclone o HBSS. </li></ol> Nota: è importante contare il numero di cellule immunitarie ottenute da ogni cuore dopo la procedura di isolamento delle cellule immunitarie. 5. Rappresentante dei risultati: Un esempio di isolato mastociti cardiaci ottenuti con questa tecnica e colorati con blu di toluidina e safranina O / alcian blu sono presentati nelle figure 2A e 2B, rispettivamente. Come si può vedere in figura 3, L'albero cardiaco, hanno mantenuto la loro capacità di rilascio di istamina dopo il trattamento con attivatori noto come 48/80 composto e sostanza P, come descritto nella Morgan et al. 9 appezzamenti Rappresentante dispersione di citometria a flusso delle cellule CD4 + e cellule CD8 + sono presentati nelle figure 4 e 5, rispettivamente. I linfociti T sono ulteriormente identificati e fenotipizzati come una popolazione di cellule da questa tecnica. Figura 1. Diagramma di flusso della procedura di isolamento delle cellule cardiache immunitario. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3020/3020fig2.jpg"> . Immagini rappresentative Figura 2 istologica dei mastociti cardiaci sono macchiati come segue: (A) con blu di toluidina e (B) sono safranina O / Alcian blu. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3020/3020fig3.jpg"> Figura 3. Studio funzionale dei mastociti cardiaci isolati dalla regione epicardico miocardico e stimolati con 48/80 composto (10μg/mL) e sostanza P (10μM). <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3020/3020fig4.jpg"> Figura 4. Rappresentante trame citometria a flusso dispersione dei CD4 + isolate cellule marcate con sostanza P (1:100 dilutione). <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/3020/3020fig5.jpg"> Figura 5. Citometria a flusso rappresentante di isolate cellule CD8 + etichettati con Sostanza P (diluizione 1:100).

<ol><li>Brower, G. L., Chancey, A. L., Thanigaraj, S., Matsubara, B. B., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cause+and+effect+relationship+between+myocardial+mast+cell+number+and+matrix+metalloproteinase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cause and effect relationship between myocardial mast cell number and matrix metalloproteinase activity.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 283, H518-H525 (2002).</li>
<li>Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+inhibition+of+mast+cell+degranulation+prevents+left+ventricular+remodeling+induced+by+chronic+volume+overload+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic inhibition of mast cell degranulation prevents left ventricular remodeling induced by chronic volume overload in rats.</a> Journal of Cardiac Failure. 11, 548-556 (2005).</li>
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<li>Levick, S. P., Gardner, J. D., Holland, M., Hauer-Jensen, M., Janicki, J. S., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+from+adverse+myocardial+remodeling+secondary+to+chronic+volume+overload+in+mast+cell+deficient+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Protection from adverse myocardial remodeling secondary to chronic volume overload in mast cell deficient rats.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 43, 56-61 (2008).</li>
<li>Levick, S. P., McLarty, J. L., Murray, D. B., Freeman, R. M., Carver, W. E., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+Mast+Cells+Mediate+Left+Ventricular+Fibrosis+in+the+Hypertensive+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Cardiac Mast Cells Mediate Left Ventricular Fibrosis in the Hypertensive Rat.</a> Hypertension. 53, 1041-1047 (2009).</li>
<li>Batista, M. L., Santos, R. V., Cunha, L. M., Mattos, K., Oliveira, E. M., Seelander, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+pro-inflammatory+cytokine+production+and+peritoneal+macrophage+function+in+rats+with+chronic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Changes in the pro-inflammatory cytokine production and peritoneal macrophage function in rats with chronic heart failure.</a> Cytokine. 34, 284-290 (2006).</li>
<li>Galli, S. J., Tsai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+Cells%3A+Versatile+regulator+of+inflammation%2C+tissue+remodeling%2C+host+defense+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dermatological+Science%22%5BJournal%5D)">Mast Cells: Versatile regulator of inflammation, tissue remodeling, host defense and homeostasis.</a> Journal of Dermatological Science. 49, 7-19 (2008).</li>
<li>Yndestad, A., Holm, A. M., Muller, F., Simonsen, S., Froland, S. S., Gullested, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+inflammatory+cytokines+and+activation+markers+in+T-cells+from+patients+with+chronic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of inflammatory cytokines and activation markers in T-cells from patients with chronic heart failure.</a> Cardiovasc. Res. 60, 141-146 (2003).</li>
<li>Bozkurt, B., Kribbs, S. B., Clubb, F. J., Michael, L. H., Didenko, V. V., Hornsby, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiologically+Relevant+Concentrations+of+Tumor+Necrosis+Factor-%C9%91+Promote+Progressive+Left+Ventricular+Dysfunction+and+Remodeling+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pathophysiologically Relevant Concentrations of Tumor Necrosis Factor-ɑ Promote Progressive Left Ventricular Dysfunction and Remodeling in Rats.</a> Circulation. 97, 1382-1391 (1998).</li>
<li>Frangogiannis, N. G., Lindsey, M. L., Michael, L. H., Youker, K. A., Bressler, R. B., Mendoza, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+Cardiac+Mast+Cells+Degranulate+and+Release+Preformed+TNF-%C9%91%2C+Initiating+the+Cytokine+Cascade+in+Experimental+Canine+Myocardial+Ischemia%2FReperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Resident Cardiac Mast Cells Degranulate and Release Preformed TNF-ɑ, Initiating the Cytokine Cascade in Experimental Canine Myocardial Ischemia/Reperfusion.</a> Circulation. 98, 699-710 (1998).</li>
<li>Jobe, L. J., Melendez, G. C., Levick, S. P., Du, Y., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TNF-%CE%B1+inhibition+attenuates+adverse+myocardial+remodeling+in+a+rat+model+of+volume+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">TNF-α inhibition attenuates adverse myocardial remodeling in a rat model of volume overload.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1462-H1468 (2009).</li>
<li>Forman, M. F., Brower, G. L., Janicki, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+histamine+secretion+during+isolation+of+rat+cardiac+mast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">Spontaneous histamine secretion during isolation of rat cardiac mast cells.</a> Inflammation Research. 53, 453-457 (2004).</li>
<li>Levick, S. P., Murray, D. B., Janicki, J. S., Brower, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+nervous+system+modulation+of+inflammation+and+remodeling+in+the+hypertensive+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Sympathetic nervous system modulation of inflammation and remodeling in the hypertensive heart.</a> Hypertension. 55, 270-276 (2010).</li>
<li>Morgan, L., Levick, S., Voloshenyuk, T., Murray, D., Forman, M., Brower, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+isolating+functional+mast+cells+from+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">A novel technique for isolating functional mast cells from the heart.</a> Inflammation Research. 57, 241-246 (2008).</li>
</ol>

Non abbiamo nulla da rivelare.

Questo metodo di isolare le cellule immunitarie cardiaca permette l&#39;analisi della loro funzione, fenotipo, e la maturità senza l&#39;attivazione indesiderata che si verifica in genere nel corso di una tecnica tradizionale isolamento digestione enzimatica. Il numero medio totale di cellule ottenute con questa tecnica è di circa 400.000 per il cuore di ratto, e colorazione differenziale e l&#39;analisi di citometria a flusso di queste cellule indica popolazione mista di linfociti T (~ 70%), i macrofagi (~ 12%) e masto...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente e </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Hanks Balanced Salt &#39; </td><td> Sigma </td><td> H4891 </td><td> Una bottiglia fa 1 L di Salt Balance Hanks &#39; Soluzione. Equilibrio ricostituire Hanks &#39;Salt Soluzione come parte della procedura. </td></tr><tr><td> Antibiotico-Antimyotic </td><td> Gibco </td><td> 15240-062 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H3784 </td><td></td></tr><tr><td> Albumina di siero bovino </td><td> Sigma </td><td> A3912 </td><td></td></tr><tr><td> Flacone da 250 ml Nalogene Filtro </td><td> Thermoscientific </td><td> 157-0020 </td><td></td></tr><tr><td> 12 N HCL </td><td> Fisher Scientific </td><td> CAS 7647-01-0 </td><td> Per 6 N, aggiungere volumi uguali di HCL al deionizzataacqua. </td></tr><tr><td> 10 N NaOH </td><td> Fisher Scientific </td><td> SC267 </td><td> Per 5 N, aggiungere volumi uguali di NaOH in acqua deionizzata. </td></tr><tr><td> Doppia acqua distillata </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabella di attrezzature specifiche: <table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente e </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> 3-O sutura in seta intrecciata </td><td> Ethicon Products </td><td> SA64H </td><td></td></tr><tr><td> Ventilatore piccoli animali </td><td> CWE Incorporated </td><td> SAR-830 </td><td> Impostare la velocità di respirazione a 40,5 respiri al minuto. </td></tr><tr><td> Smusso 18 gauge </td><td> BD Biosciences </td><td> 305199 </td><td> Trim aghi di 1 / 2 a 3 / 4 della sua lunghezza originale per l&#39;uso come un tubo tracheale. </td></tr><tr><td> Teflon Tip (con ago rimosso) di 24-gauge Baxter rapido cath catetere </td><td> Baxter </td><td> 2N111 </td><td> Ridurre la lunghezza punta in Teflon da 1 / 2 a 3 / 4. </td></tr><tr><td> 10 cc siringa </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-823-16B </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml Falcon Tubi </td><td> BD Biosciences </td><td> 352097 </td><td></td></tr><tr><td> Sorvall RT6000B centrifuga refrigerata </td><td> Fisher Scientific </td><td> 75-004-377 </td><td> Ricordarsi di pre-raffreddare e conservare a 4 ° C. </td></tr><tr><td> Hyclone </td><td> Thermoscientific </td><td> S300030.02 </td><td></td></tr><tr><td> Emocitometro </td><td> Hausser scientifico </td><td> HS-LB-1483 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule cardiache funzionali immunitario

Isolation of Functional Cardiac Immune Cells

Cardiaco cellule immunitarie stanno guadagnando interesse per i ruoli che svolgono nella rimodellamento patologico in molte malattie cardiache 1-5 Queste cellule del sistema immunitario, che includono i mastociti, le cellule T ei macrofagi;. Immagazzinare e rilasciare una varietà di mediatori biologici attivi tra cui citochine e proteasi, quali triptasi. 6-8 Questi mediatori hanno dimostrato di essere giocatori chiave nel metabolismo della matrice extracellulare, attivando metalloproteinasi della matrice o causare accumulo di collagene modulando il fibroblasti cardiaci &#39;funzione. 9-11 Tuttavia, le tecniche disponibili per isolare le cellule immunitarie hanno cardiaca stato problematico perché usano collagenasi batterica per digerire il tessuto miocardico. Questa tecnica causa attivazione delle cellule immunitarie e di conseguenza una perdita di funzione. Per esempio, i mastociti cardiaci diventano significativamente meno sensibili ai composti che causano la degranulazione. 12 Perciò, abbiamo sviluppato una tecnica che permette di tche l&#39;isolamento di cellule cardiache funzionali del sistema immunitario che porterebbe ad una migliore comprensione del ruolo di queste cellule nelle malattie cardiache. 13, 14 Questo metodo richiede una certa familiarità con la posizione anatomica del ratto processo xifoideo, ascella e legamento falciforme, pericardio e del cuore. Questi punti di riferimento sono importanti per aumentare il successo della procedura e per garantire una maggiore resa di cellule immunitarie cardiaco. Queste isolato cellule cardiache immunitarie possono quindi essere utilizzati per la caratterizzazione di funzionalità, fenotipo, la maturità e co-coltura con altri esperimenti cellule cardiache per ottenere una migliore comprensione delle loro interazioni.

Questo metodo per isolare le cellule immunitarie funzionale dal cuore offre un&#39;alternativa ai metodi convenzionali di digestione collagenasi, che provoca indesiderati attivazione immunitaria delle cellule, con conseguente diminuzione di risposta di queste cellule. Il nostro metodo di isolamento rese funzionali cellule cardiache immunitario evitando problemi legati alla digestione enzimatica.

Isolamento di cellule cardiache funzionali immunitario

Le cellule immunitarie cardiache stanno suscitando un crescente interesse per i ruoli che svolgono nel rimodellamento patologico di molte malattie cardiache.1-5 Queste cellule immunitarie, che ...

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare cellule immunitarie cardiache funzionali. Questo viene ottenuto innanzitutto ventilando il ratto ed esponendo la sacca pericardica che circonda il cuore. Successivamente, una soluzione salina equilibrata di Hank o HBSS viene iniettata nello spazio pericardico.Quindi l'HBSS viene aspirato, il quale ora contiene cellule immunitarie provenienti dallo spazio pericardico. Infine, viene quantificato il numero di cellule immunitarie ottenute dalla procedura di isolamento. In ultima analisi, possono essere eseguiti esperimenti di degranulazione chimica o di co-coltura, analisi mediante citometria a flusso, analisi immunofluorescente o trattamenti farmacologici delle cellule per valutare la funzionalità e l'attività biologica delle cellule immunitarie cardiache.Ci saranno tre persone del mio laboratorio che mostreranno questa procedura: Jennifer McLarty, una studentessa laureata, Giselle Melendez, una ricercatrice post-dottorato, e il mio tecnico capo Spencer. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti di isolamento delle cellule immunitarie, ad esempio la digestione con collaghenasi, è che impedisce l'attivazion

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tessuto cardiaco umano alberga popolazioni di cellule precursore perivascolari multipotenti che possono essere adatti per la rigenerazione del miocardio. La tecnica qui descritta permette l'isolamento e la purificazione simultanea di due popolazioni di cellule stromali multipotenti associati con i vasi sanguigni nativi, cioè CD146 + CD34 - periciti e CD34 + CD146 - cellule avventiziale, dal miocardio umano.

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Questo protocollo presenta un metodo semplice ed efficace per isolare, identificare e quantificare le cellule immuni che risiedono nel miocardio dei topi durante stato stazionario o l'infiammazione. Il protocollo combina digestione enzimatica e meccanica per la generazione di una sospensione di singola cellula che può essere ulteriormente analizzata tramite flusso cytometry.

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Presentato qui è un protocollo per isolare vari sottoinsiemi di macrofagi e altre cellule non immuni dal miocardio umano e topidano preparando una sospensione a singola cellula attraverso la digestione enzimatica. Vengono inoltre presentati schemi di Gating per l'identificazione e la caratterizzazione basata sulla citometria del flusso di macrofagi.

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Isolamento simultaneo e cultura di miociti atriali, miociti ventricolari e non miociti da un cuore di topo adulto

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Isolamento e coltura di macrofagi cardiaci residenti dal nodo senoatriale e atrioventricolare murino

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Impara a isolare cellule immunitarie cardiache funzionali dal ratto usando HBSS per lavaggi pericardici. Questo metodo evita l'attivazione enzimatica e preserva la reattività cellulare per analisi successive.

Isolamento di cellule cardiache funzionali immunitario

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