JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:16 min. • July 8th, 2025
I fosfolipidi sono lipidi complessi contenenti gruppi fosfato. Queste molecole sono idrolizzate da un enzima chiamato fosfolipasi.
Per eseguire il saggio di attività della fosfolipasi, prelevare un'emulsione di tuorlo d'uovo ricca di fosfolipidi, che fungono da substrato per l'enzima. Aggiungere il tuorlo a una soluzione calda di agarosio contenente cloruro di sodio, che migliora la stabilità delle proteine del tuorlo durante le fasi successive.
Integrare la miscela con cloruro di calcio e un colorante fluorescente: la rodamina. Versare il composto in una piastra di Petri. Dopo la solidificazione, i fosfolipidi del tuorlo rimangono distribuiti in modo omogeneo nella matrice di gel di agarosio.
Utilizzando un tubo, creare pozzetti adeguatamente distanziati nel gel. Aggiungere ai pozzetti concentrazioni variabili di estratto proteico grezzo contenente fosfolipasi. Incubare la piastra a temperatura fisiologica.
La fosfolipasi dell'estratto si diffonde radialmente nel gel. Gli ioni calcio nel gel si legano alla fosfolipasi, attivando gli enzimi. Questo enzima scinde i fosfolipidi, generando acidi grassi liberi. Le molecole di rodamina nel gel formano un complesso con gli acidi grassi r
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