Saggio di chiralità cellulare con micropatterning a forma di anello: una tecnica in vitro per determinare la chiralità multicellulare basata sull'allineamento cellulare su micropattern a forma di anello

Per determinare la chiralità delle cellule di mammifero in vitro - la distorsione sinistra-destra delle cellule per allinearsi in un orientamento verso sinistra o verso destra in condizioni di confinamento - iniziare con vetrini rivestiti in oro fabbricati su misura in una piastra multipozzetto contenente terreno. I vetrini comprendono micropattern di isole a forma di anello di fibronectina che promuove l'adesione cellulare, riempite con un monostrato autoassemblato resistente all'adesione cellulare.

Successivamente, seminare un volume appropriato di sospensione di cellule di mammifero sui vetrini e incubare. Le cellule si adsorbono sui micropattern ad anello contenenti fibronectina. Il monostrato autoassemblato circostante impedisce l'adesione non specifica delle celle al di fuori dei confini dell'anello.

Sostituire il supporto, rimuovendo eventuali celle non attaccate, con un supporto nuovo. Aggiungere un farmaco che interferisce con l'actina a una serie di vetrini e incubare.

Le cellule aderenti proliferano, diffondendosi e assumendo la forma delle isole di fibronectina sottostanti, mentre riorganizzano le loro fibre di actina in risposta ai segnali spaziali, che confinano il mo