Saggio di captazione delle vescicole extracellulari: un metodo per visualizzare e quantificare l'assorbimento cellulare delle vescicole extracellulari utilizzando la tecnica di imaging a fluorescenza 3D

Per facilitare la comunicazione cellulare, le cellule secernono vescicole extracellulari, EV - strutture di dimensioni nanometriche racchiuse da una membrana lipidica. Le vescicole extracellulari trasportano vari carichi biologici, tra cui macromolecole e metaboliti, per consegnarle alle cellule riceventi.

Per visualizzare l'assorbimento delle vescicole extracellulari da parte delle cellule utilizzando la microscopia confocale, in primo luogo, prelevare le vescicole extracellulari appena isolate. Queste vescicole extracellulari sono pre-marcate con anticorpi legati a una sonda fluorescente per una successiva facile visualizzazione.

Aggiungere un volume adeguato di vescicole extracellulari marcate in fluorescenza a una coltura cellulare ricevente aderente. Incubare per il periodo desiderato. Durante l'incubazione, una sottopopolazione delle vescicole extracellulari marcate si attacca superficialmente alla superficie cellulare, mentre altre vescicole extracellulari vengono internalizzate.

Aggiungi un colorante fluorescente diverso per etichettare il citoplasma cellulare, aiutando a distinguere le vescicole extracellulari internalizzate da quelle aderenti alla cellula ricevente. Posiz