Saggio di protezione enzimatica a base di lisostafina: un metodo in vitro per quantificare il carico intracellulare di Staphylococcus aureus mediante uccisione selettiva mediata da enzimi di batteri extracellulari

Iniziare con un monostrato di cellule epiteliali in un terreno di coltura adatto. Queste cellule esprimono integrine, recettori di superficie che attraversano la membrana. Il terreno di coltura contiene fibronectina secreta da cellule epiteliali, una glicoproteina.

Aggiungere una sospensione di Staphylococcus aureus, un batterio patogeno gram-positivo, alla piastra di coltura. Questi batteri contengono proteine leganti la fibronectina, o FnBP, ancorate nella loro parete cellulare.

Incubare la piastra per avviare l'infezione batterica, in cui la fibronectina si lega all'FnBP dei batteri e alle integrine sulle cellule ospiti epiteliali. Questa interazione tripartita FnBP-fibronectina-integrina media l'internalizzazione batterica nell'ospite.

Trattare le cellule con lisostafina, un enzima endopeptidasi, e incubare. La lisostafina entra selettivamente nelle pareti cellulari dei batteri extracellulari. Sfalda i ponti della pentaglicina nei peptidoglicani, lisicandoli così mentre i batteri intracellulari rimangono protetti dalla lisostafina.

Integrare la coltura con un enzima proteolitico per disattivare la lisostafina rimanente, impedendole di uccidere i batteri intracellulari nei passa