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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:03 min. • July 8th, 2025
Nei tessuti, il ferro, un minerale essenziale cruciale per vari processi metabolici, esiste normalmente sequestrato alle emoproteine e alle proteine del ferro non eme. Le emoproteine includono ferro ferroso o eme legato agli anelli porfirinici, mentre le proteine del ferro non eme mancano della struttura dell'anello porfirinico e comprendono principalmente ferro ferrico o non eme.
Per stimare il contenuto di ferro non eme nel tessuto epatico di topo, trattare un frammento di tessuto epatico di topo essiccato e raccolto con basse concentrazioni di acido cloridrico e acido tricloroacetico. Incubare ad alte temperature per digerire il tessuto e facilitare la precipitazione proteica indotta dall'acido.
A causa delle basse concentrazioni di acido, il ferro non eme viene rilasciato dalle proteine associate. Il ferro eme, essendo legato all'anello porfirinico, rimane inalterato.
Dopo il raffreddamento, trasferire il volume desiderato di surnatante contenente ferro non eme in una piastra a più pozzetti. Aggiungere il ferro-chelante cromogenico, bofenantrolina sulfonato, BPS, addizionato con acido tioglicolico, un agente riducente, in un tampone adatto e incubare.
L'acido tioglicolico riduc
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