JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:46 min. • July 8th, 2025
Gli osteoclasti, macrofagi multinucleati, facilitano il riassorbimento osseo - la rottura del tessuto osseo e il rilascio di minerali ossei.
Per quantificare il riassorbimento degli osteoclasti in vitro, coltivare cellule mononucleate del sangue periferico umano in un fattore stimolante le colonie di macrofagi, M-CSF, contenente terreni per la differenziazione in cellule progenitrici degli osteoclasti e l'attaccamento. Raccogliere i progenitori degli osteoclasti e centrifugare.
Pipettare la sospensione cellulare risoluta in un terreno, integrato con M-CSF e attivatore del recettore del ligando del fattore nucleare kappa-Β, RANKL, in pozzetti per piastre multipozzetto rivestiti con fosfato di calcio, che imita la componente ossea inorganica. M-CSF e RANKL causano la differenziazione dei progenitori degli osteoclasti e la fusione negli osteoclasti, attivando il riassorbimento.
Gli osteoclasti attivati si attaccano al rivestimento di fosfato di calcio, riorganizzando il loro citoscheletro per formare una zona di tenuta ricca di actina, e sviluppano bordi arruffati, che secernono protoni e idrolasi acide. L'ambiente acido risultante dissolve il rivestimento di fosfato di calcio, rilasc
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