JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:25 min. • July 8th, 2025
Nelle cellule metabolicamente attive, i substrati contenenti carbonio vengono ossidati attraverso una serie di reazioni biochimiche per generare energia e rilasciare anidride carbonica come sottoprodotto.
Per determinare il tasso di ossidazione del substrato, iniziare con una coltura aderente delle cellule indifferenziate desiderate. Integrare le cellule in un mezzo con un substrato adatto contenente carbonio radioattivo quattordici nella sua spina dorsale e incubare.
Le cellule consumano il substrato e lo ossidano per rilasciare anidride carbonica radiomarcata, che si diffonde dalle cellule nel mezzo circostante.
Trasferire questo mezzo in un gruppo di intrappolamento del gas contenente acido perclorico per estinguere la reazione. Questo tubo contiene una carta da filtro imbevuta di idrossido di sodio montata all'interno del tappo del tubo. Chiudere il tappo e incubare.
Durante l'incubazione, l'anidride carbonica, nella sua forma gassosa, viene rilasciata all'interno della provetta. L'idrossido di sodio assorbe l'anidride carbonica radiomarcata, intrappolandola nella carta da filtro. Trasferire questa carta da filtro in una fiala contenente un cocktail di scintillazione e posizion
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici