JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:10 min. • July 8th, 2025
Le septine sono proteine del citoscheletro che comprendono un dominio di legame GTP affiancato da domini amminici e carbossilici terminali, con una capacità intrinseca di auto-assemblarsi in filamenti e strutture di ordine superiore nella membrana plasmatica interna per diverse funzioni cellulari.
Per studiare le interazioni septina-membrana in vitro utilizzando un imitatore biologico della membrana, ottenere una provetta da microcentrifuga tagliata. Applicare l'adesivo ultravioletto sul bordo piatto non tagliato e posizionarlo su un vetrino coprioggetti in vetro idrofilizzato trattato al plasma. Dopo l'esposizione alla luce ultravioletta, l'adesivo polimerizza, creando una camera di reazione aperta.
Trasferire nella camera vescicole lipidiche unilamellari zwitterioniche monodisperse della composizione lipidica desiderata, integrate con tampone contenente cationi mono- e bivalenti. I cationi facilitano l'assorbimento e l'accumulo delle vescicole lipidiche sul vetrino. Agitare delicatamente la camera, avviando la rottura delle vescicole, e incubare.
Le vescicole rotte si dispiegano e si fondono con il vetrino coprioggetti attraverso i loro gruppi di testa idrofili, formando chiazze
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