Saggio del lisato di amebociti di limulus turbidimetrico: una tecnica per rilevare e quantificare la contaminazione da endotossine in farmaci nanoformulati

L'endotossina, una tossina batterica gram-negativa presente sulla membrana esterna, è un lipopolisaccaride, LPS, composto principalmente da lipidi e polisaccaridi, tra cui il lipide A e l'antigene O. Quando viene rilasciato durante l'infezione, viene riconosciuto dal sistema immunitario, innescando risposte infiammatorie basate sulle citochine.

Per stimare la contaminazione da endotossine in una nano-formulazione di farmaci liposomiali utilizzando il lisato di amebociti Limulus, LAL, preparare provette di reazione, una contenente il farmaco e l'altra contenente il farmaco addizionata con una concentrazione nota di endotossine.

Aggiungere il reagente LAL contenente lisato proteico ottenuto da granchio a ferro di cavallo, Limulus polyphemus, cellule del sangue o amebociti. Il lisato comprende serina proteasi inattive - fattore B, fattore C, enzima proclottante - e una proteina coagulante del gel, il coagulogeno.

Agitare i tubi e caricarli in un torbidimetro per misurare la torbidità delle soluzioni.

In presenza di LPS contaminante legato a farmaci liposomiali, il fattore C sensibile all'LPS viene attivato autocataliticamente, che quindi scinde e attiva il fattore B che converte l'enz