Saggio del lisato di amebociti Gel-Clot Limulus: un metodo per il rilevamento dell'endotossina batterica nelle formulazioni di nanoparticelle
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:57 min. • July 8th, 2025
La membrana esterna dei batteri Gram-negativi contiene endotossine chiamate lipopolisaccaridi, o LPS. L'LPS ha una porzione oligosaccaridica idrofila e una regione lipidica A idrofobica.
Una volta all'interno dell'ospite, le proteine che legano l'LPS riconoscono le endotossine. Queste proteine legano quindi i recettori sulle cellule immunitarie circolatorie. Questo legame attiva le cellule immunitarie, che rilasciano fattori infiammatori. La sovrapproduzione di questi fattori esagera la risposta immunitaria, causando la morte cellulare.
Per rilevare le endotossine utilizzando il lisato di amoebociti Limulus, o saggio LAL, assumere una formulazione contenente endotossine legate alla superficie lipofila delle nanoparticelle attraverso le loro porzioni lipidiche A idrofobiche.
Aggiungere il reagente LAL alla provetta. Questo reagente è un lisato acquoso contenente enzimi e proteine inattivi derivati dagli amebociti, le cellule del sangue del granchio a ferro di cavallo.
Incubare la provetta per facilitare il legame delle endotossine al proenzima fattore C della coagulazione inattivo derivato dal lisato, attivandolo autocataliticamente.
Il fattore C attivato scinde un altro proenzima,
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