Saggio di screening enzimatico basato su idrogel polimerico cromogenico: un metodo ad alto rendimento per lo screening degli enzimi attivi dei carboidrati utilizzando substrati sintetici

Gli enzimi che degradano i carboidrati scompongono i polisaccaridi complessi in oligosaccaridi più piccoli.

Per eseguire lo screening dell'attività di degradazione enzimatica, iniziare assumendo più idrogel polimerici cromogenici, CPH, che vengono preparati tingendo i polisaccaridi con coloranti clorotriazinici di colore diverso. Ogni polisaccaride viene quindi reticolato chimicamente per formare idrogel, un substrato sintetico per la degradazione enzimatica.

Ora, erogare diversi substrati CPH in pozzetti distinti di una piastra di reazione porosa. Aggiungere una soluzione di attivazione e incubarla per garantire un'attivazione ottimale dei substrati.

Posizionare la piastra di analisi su una piastra di prodotto vuota. Centrifugare le piastre insieme a bassa velocità per facilitare una rimozione efficiente della soluzione di attivazione attraverso i pori della piastra di reazione.

Successivamente, integrare tutti i pozzetti della piastra di reazione con lo stesso tipo di enzima che degrada i carboidrati in un tampone appropriato che mantiene un pH ottimale per l'attività enzimatica. Sigillare la piastra e incubarla con una leggera agitazione per consentire una distribuzione uniforme